Ćwiczenie 6
Aminokwasy
Aminokwasy są to związki dwufunkcyjne, których cząsteczki zawierają grupy karboksylowe i
aminowe:
·ð grupa aminowa:NH2
·ð grupa karboksylowa COOH
Nomenklatura aminokwasów:
Naturalne aminokwasy posiadajÄ… nazwy zwyczajowe tworzone poprzez dodanie do nazwy
macierzystej przedrostka amino-:
np. NH2-CH2-COOH kwas aminooctowy (glicyna)
Nazewnictwo zwyczajowe tworzy się podobnie jak fluorowco- lub hydroksokwasów; np.
NH2-CH2-COOH kwas aminoetanowy, kwas a-aminooctowy
Podział aminokwasów w zależności od możliwości syntezy aminokwasu w organizmie
na:
· endogenne ( organizm potrafi je syntetyzować)
·
egzogenne (muszą być dostarczane z zewnątrz wraz z pożywieniem)
Metody otrzymywania aminokwasów
1) Hydrolityczny rozkład białka:
· enzymatyczny -przy użyciu enzymów proteolitycznych
· hydroliza kwasowa - dziaÅ‚anie wyższej temperatury na preparaty biaÅ‚kowe znajdujÄ…ce
się w 6M HCl lub 25% H2SO4. Rozkładowi ulegają tryptofan i treonina.
· hydroliza zasadowa - w obecnoÅ›ci stężonego NaOH lub Ba(OH)2. RozkÅ‚adowi
ulegajÄ… cysteina i arginina
2) Reakcja fluorowcokwasów z amoniakiem
3) Reakcja aldehydów z cyjankiem amonowym ( reakcja cyjanohydrynowa)
Właściwości fizyczne
Aminokwasy występują przede wszystkim jako substancje stałe, krystaliczne. Posiadają
słodki smak. Rozpuszczalność w wodzie jest dobra, posiadają wysokie temperatury topnienia,
natomiast nie rozpuszczajÄ… siÄ™ w rozpuszczalnikach organicznych.
Właściwości chemiczne
1) Aminokwasy jako substancje amfoteryczne, w roztworach wodnych aminokwasy wykazujÄ…
odczyn prawie obojętny, ulegają dysocjacji. Jon obojnaczy to wewnątrzcząsteczkowe
zobojętnienie grupy aminowej (-NH2) resztą karboksylową co powoduje utworzenie
wewnętrznej soli amoniowej. Taka sól posiada jednocześnie ładunek dodatni jak i ujemny,
ilości tych jonów równoważą się. W zależności od środowiska w jakim znajduje się
aminokwas ( środowisko kwaśne H+ lub środowisko zasadowe OH-) może występować w
formie kationu bÄ…dz
anionu.
Gdy będzie to środowisko kwaśne wówczas grupa ujemna aminokwasu przyjmuje H+ co
powoduje cofnięcie dysocjacji grupy karboksylowej i wówczas dany aminokwas posiada
Å‚adunek dodatni.
W przypadku odwrotnym (środowisko zasadowe) następuje przesunięcie reakcji w kierunku
powstawania anionu (odłączenie koordynacyjnie związanego protonu i przyłączenie z jonem
OH-- powstanie wody).
Punkt izoelektryczny - pI:
Dla każdego aminokwasu istnieje takie pH, w którym nie obserwuje się wędrówki jonów w
polu elektrycznym. W punkcie izoelektrycznym aminokwas występuje jako jon obojnaczy.
Aminokwasy ze względu na swoją amfoteryczność ( występowanie jonu obojnaczego) dają
jonowo zbudowane sole pod wpływem kwasów jak i zasad.
Odpowiednio dobierając stężenia CH3COOH i CH3COONa przygotowuje się szereg
probówek z roztworami o różnych wartościach pH. Dodaje się do nich jednakową ilość
kazeiny. Wartość pH w probówce, w której wystąpi najobfitszy osad, odpowiada pI kazeiny.
2) Tworzenie wiązań peptydowych
WiÄ…zanie peptydowe Å‚Ä…czy grupÄ™ Ä…-aminowÄ… jednego aminokwasu z grupÄ… Ä…-karboksylowÄ…
drugiego aminokwasu. Występuje ono w dwóch formach izomerycznych: cis i trans. W
wiązaniu peptydowym wyróżnić można dwie formy mezomeryczne (rezonansowe), nadające
wiązaniu węgiel-azot częściowy charakter wiązania podwójnego. Efekt ten wzmacnia siłę
wiązania oraz silnie hamuje rotację wokół wiązania C-N, dzięki czemu wiązanie jest płaskie.
Możliwa natomiast jest rotacja wokół wiązań z grupami bocznymi.
3) Reakcje grupy karboksylowej:
· reakcja estryfikacji- polega ona na reakcji aminokwasu wraz z alkoholem powstajÄ…
wówczas estry ( nie posiadają one właściwości amfoterycznych), a wykazują właściwości
aminy
· dekarboksylacja - aminokwasy mogÄ… przeksztaÅ‚cić siÄ™ w aminy gdy na nie zadziaÅ‚amy
podczas ogrzewania roztworem Ba(OH)2
· tworzenie kompleksów - a-aminokwasy tworzÄ… kompleksy z kationami metali (głównie
miedzi). Powstają wówczas barwne sole kompleksowe.
4) Reakcje grupy aminowej:
· Deaminacja - aminokwasy posiadajÄ…ce I-rzÄ™dowÄ… grupÄ™ aminowÄ… pod wpÅ‚ywem kwasu
azotowego (III) utleniajÄ… siÄ™ do hydrokwasu i uwalniajÄ… grupÄ™ aminowÄ… w postaci azotu.
Są różne rodzaje deaminacji:
· hydrolityczna
· hydrolityczna z dekarboksylacjÄ…
· przez redukcjÄ™
· desaturatywna
· Utlenianie; Utlenianie aminokwasów prowadzi do powstawania ketokwasów.
· Zasady Schiffa; Aminokwasy, które sÄ… powiÄ…zane w postaci zasady Schiffa mogÄ… ulegać
różnym przemianom biochemicznym tj. transaminacja, dekarboksylacja.
Wykrywanie aminokwasów
1. Reakcja ninhydrynowa
Aminokwasy w tej reakcji wraz z ninhydryną dają fiołkowo-niebieskie zabarwienie.
2. Reakcja ksantoproteinowa
Reakcja te służy do wykrywania aminokwasów aromatycznych (fenyloalanina, tyrozyna,
tryptofan). Dodanie stężonego kwasu azotowego (V) powoduje występowanie żółtego
zabarwienia, spowodowanego powstaniem pochodnych nitrowych aminokwasów.
Przebieg ćwiczenia 6
Doświadczenie 1. Oznaczanie punktu izoelektrycznego pI kazeiny
Przygotowanie roztworu kazeiny:
Do zlewki (50 cm3) odważyć 0,25 g kazeiny i dodać 25 cm3 wody (ogrzanej do 40°C) oraz 5
cm3 1 M roztworu NaOH. Mieszać aż do rozpuszczenia się kazeiny, po czym wprowadzić
5cm3 1 M roztworu CH3COOH i uzupełnić do kreski wodą. Otrzymuje się w ten sposób lekko
opalizujący roztwór kazeiny w 0,1 M roztworze CH3COONa.
Opis ćwiczenia
1. Przygotować 9 suchych probówek.
2. Do pierwszej odmierzyć 3,2 cm3 1 M roztworu CH3COOH i 6,8cm3 wody, a do
następnych ośmiu po 5 cm3 H2O.
3. Po dokładnym wymieszaniu zawartości w probówce pierwszej, przenieść z niej 5 cm3
do drugiej, a z tej, po wymieszaniu, 5 cm3 do trzeciej itd. Do każdej probówki dodać
po 1 cm3 roztworu kazeiny i lekko wymieszać. Obserwować roztwory natychmiast po
zmieszaniu i po 30 min.
Nr
1 2 3 4 5 6 7 8 9
probówki
Ilość ml 1
1,6 0,8 0,4 0,2 0,1 0,05 0,025 0,0125 0,0062
M
CH3COOH
pozostałego
w
probówkach
Po upływie 30 minut należy zapisać obserwacje oraz obliczyć pH dla wszystkich probówek.
Następnie wyznaczyć punk izoelektryczny dla kazeiny.
Opracowanie wyników
1. Obliczyć pH roztworów buforowych w poszczególnych probówkach wykorzystując
równanie Hendersona-Hasellbacha:
[ zasada]
pH = -log Ka + log ____________________
[kwas]
gdzie:
stała dysocjacji dla CH3COOH Ka = 1,753 x 10-5
W obliczeniach należy również uwzględnić stężenie octanu sodu dodawanego z kazeiną
(0,1M).


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
cw 3 oznaczanie stezenia bialka
UP biol ćw prezentacja białka
MATLAB cw Skrypty
cad2 cw 5 6
cw formularz
Cw 2 zespol2 HIPS
Cw 9 Wzmacniacz mocy
Cw 1
Białka szoku cieplnego – nowy marker w diagnostyce patomorfologicznej nowotworów gruczołu sutkowego
metrologia cw 1 protokol
Sprawozdanie Ćw 2
Biofizyka kontrolka do cw nr
Białka Zarządzanie jakością
systemy operacyjne cw linux apache mysql
cw 7
ćw oswajające z piłką lekcja dla dzieci

więcej podobnych podstron