BIOTECHNOLOGIA
POJCIA:
1. Biotechnologia jest interdyscyplinarną dziedziną łączącą w sobie nauki techniczne i przyrodnicze,
obejmującą badanie, wytwarzanie i wykorzystanie DNA/RNA, białek/enzymów, drobnoustrojów, kultur
komórkowych w procesach modyfikacji genetycznej, biosyntezy, biotransformacji, bioutylizacji a także
wyodrębnianie i modyfikacje tak otrzymanych bioproduktów.
2. Biotechnologia tradycyjna- przebiegająca z użyciem drobnoustrojów i komórek organizmów
wyższych niż zawierających obcego materiału genetycznego
3. Biotechnologia nowoczesna gdzie stosowane są szczepy drobnoustrojów lub inne linie
komórkowe skonstruowane metodami inżynierii genetycznej
4. Inżynieria genetyczna-ingerencja w materiał genetyczny organizmów, w celu zmiany ich
właściwości dziedzicznych. Polega na wprowadzaniu do komórek organizmu biorcy, określonego
odcinka DNA dawcy.
5. Biotechnologia czerwona wykorzystywana w ochronie zdrowia i medycynie. Jest ważnym i
dynamicznie rozwijającym się obszarem biotechnologii, w szczególności w zakresie produkcji nowych
biofarmaceutyków, rozwoju diagnostyki genetycznej, geoterapii i
ksenotransplantologii.
6. Biotechnologia zielona związana jest z rolnictwem, obejmuje zastosowanie metod inżynierii
genetycznej w celu doskonalenia produkcji roślinnej i zwierzęcej. Ważnym obszarem jest
wprowadzanie transgenicznych roślin do produkcji szczepionek doustnych i rekombinowanych białek
a także wykorzystanie tychże roślin jako surowców odnawialnych w biorafineriach.
7. Biotechnologia biała- biotechnologia przemysłowa wykorzystująca systemy biologiczne w
produkcji przemysłowej i ochronie środowiska
8. Fermentacja- z łac. burzenie się. W praktyce biotechnologicznej służy do określania przemian
chemicznych w wyniku aktywności metabolicznej drobnoustrojów czyli obejmuje zarówno fermentacje
beztlenowe jak np. fermentację etanolową jak również tlenowe np. fermentację octanową.
9. Mikroorganizm (drobnoustrój) - organizm obserwowany dopiero pod mikroskopem.
Mikroorganizmami są bakterie, archeany, pierwotniaki i niektóre grzyby.
10. Komórka prokariotyczna- komórka nie posiadająca jądra komórkowego. Podstawowym
materiałem genetycznym jest nukleoid. Materiał genetyczny nie jest oddzielony od reszty komórki
żadną błoną.
11. Komórka eukariotyczna - materiał genetyczny tej komórki jest umieszczony w jądrze.
Zawierające DNA z histonami upakowane w chromosomy.
12. Jądro- najważniejsze z organelli komórkowych występująca w komórkach organizmów jądrowych
(Eukarionty), odgrywająca decydującą rolę w przekazywaniu cech dziedzicznych i przebiegu
przemiany materii.
13. Chromosomy-samoodtwarzające się, stałe składniki jądra komórkowego, będące nosicielami
genów.
14. Gen-odcinek DNA nadający komórce zdolność do tworzenia różnych form RNA, pośredniczy w
kodowaniu białek. Gen decyduje o przekazywaniu poszczególnych dziedzicznych cech organizmu.
15. Genom człowieka-kompletny zestaw informacji genetycznej człowieka; składa się z 2 odrębnych
genomów.
16. Ekspresja genu - proces, w którym informacja genetyczna zawarta w genie zostaje odczytana i
przepisana na jego produkty, które są białkami lub różnymi formami RNA.
17. DNA
18. Nukleozydy-są zbudowane z zasady heterocyklicznej (adenina,cytozyna,guanina,uracyl,tymina) i
odpowiedniego cukru deoksyrybozy lub rybozy w zależności od tego w skład którego biopolimeru
wchodzą DNA czy RNA
19. Nukleotyd- połączenia rybozy lub deoksyrybozy, zasady purynowej albo pirymidynowej i kwasu
fosforowego.
20. Zasada heterocykliczna- związek organiczny wchodzący w skład nukleozydu.
21. Replikacja-jest to powielanie materiału genetycznego.
22. Polimeraza DNA - enzym katalizujący syntezę DNA w czasie replikacji lub naprawy DNA.
23. Ligaza-enzym restrykcyjny, łączący odcinki DNA.
24. Transkrypcja w genetyce oznacza proces syntezy RNA na matrycy DNA przez różne polimerazy
RNA. Jest to, zatem przepisywanie informacji zawartej w DNA na RNA.
25. mRNA- cząsteczki informacyjne RNA powstające jako kopie odcinków DNA podczas transkrypcji
w biosyntezie białka.
26. Ekson- kodująca część cząsteczki DNA, ulegając transkrypcji pojawia się w dojrzałej cząsteczce
RNA. Może kodować element białkowy.
27. Intron- niekodująca część cząsteczki DNA, ulega transkrypcji, jest wycinany podczas obróbki
potranskrypcyjnej, w procesie splicingu.
28. Kod genetyczny-to zasada, według której informacja genetyczna, zawarta w DNA lub RNA, w
komórkach wszystkich organizmów może ulegać "tłumaczeniu" na kolejność aminokwasów w białka w
procesie translacji. Kod genetyczny jest: kodem trójkowym, zdegenerowany, bezprzecinkowy,
uniwersalny, jednoznaczny, kodony nie zachodzą na siebie.
29. Kodon- jednostka informacji genetycznej; 3 kolejne nukleotydy w łańcuchu DNA lub mRNA,
wyznaczające rodzaj i miejsce 1 aminokwasu w łańcuchu polipeptydu podczas biosyntezy białka w
komórce.
30. Kodony synonimowe- kodony określające ten sam aminokwas.
31. Degeneracja kodu genetycznego-nadmiarowość kodu genetycznego, przejawiająca się tym, że
określony aminokwas jest kodowany przez więcej niż jeden kodon
32. Mutacja-jest to nagła zmiana materiału genetycznego. Mutacja może być wywołana samorzutnie,
lub przez czynniki zewnętrzne.
33. tRNA- transportujący RNA,pośredniczy w przyłączaniu kolejnych aminokwasów w procesie
biosyntezy białka.
34. Antykodon-3 kolejne nukleotydy tRNA, stanowiące jednostkę czynną w procesie syntezy białka w
komórce
35. rRNA- rybosomowy RNA. Cząsteczki kwasu rybonukleinowego wchodzące w skład rybosomów,
biorących udział w procesie biosyntezy polipeptydów.
Rekombinowany DNA- DNA zawierający wprowadzone za pomocą wektorów dane sekwencje zasad
tworzące gen.
36. Rybosom- organelle służące do produkcji białek w ramach translacji.
37. Wektor- cząsteczka DNA mogąca być przenośnikiem interesującego nas genu i która posiada
zdolność do automatycznej replikacji w danym typie komórek.
38. Klonowanie to proces tworzenia organizmów mających taką samą informację genetyczną.
39. Klon- komórki będące swoimi wiernymi kopiami (o jednakowym składzie genetycznym).
40. Retrowirusy - rodzina wirusów, których materiał genetyczny zawarty jest w RNA. Najdokładniej
poznanym retrowirusem jest wirus HIV.
41. Odwrotna transkryptaza- proces syntezy komplementarnej nici DNA na matrycy wirusowego
RNA, katalizowany przez enzym zw. odwrotną transkryptazą.
42. Enzym restrykcyjny-enzym z grupy endonukleaz występujący w komórkach bakterii. Rozpoznaje
kreślone odcinki łańcucha DNA obcego dla komórki i wycina je.
43. Sekwencja palindromowa - jest to sekwencja rozpoznawana przez enzymy restrykcyjne.
Odczytywana z nici nonsensownej i sensownej jest taka sama.
5' A A T T 3'
3' T T A A 5'
44. Lepkie końce- kohezyjne końce fragmentu DNA, pociętego przez enzymy restrykcyjne w ten
sposób, że cięcia przesunięte są względem siebie o kilka nukleotydów.
45. cDNA- komplementarny DNA, cząsteczka DNA będąca kopią sekwencji mRNA.
46. Plazmid- dwuniciowa, kolista cząsteczka DNA naturalnie występująca w niektórych bakteriach.
Stosowana jako wektor w inżynierii genetycznej.
47. Miejsce wielokrotnego klonownia
48. Marker selekcyjny
49. Bakteriofag-wirus atakujący bakterie, zbudowany z otoczki białkowej, w której znajduje się
materiał genetyczny.
50. Kosmidy- sztucznie wytworzone wektory używane w inżynierii genetycznej. Tworzy się je łącząc
plazmidy z sekwencją cos bakteriofaga lambda.
51. PCR-(Polymerase Chain Reaction) łańcuchowa reakcja polimerazy, metoda powielania
łańcuchów DNA w warunkach laboratoryjnych, polegająca na sekwencji wielokrotnego podgrzewania i
oziębiania próbki.
52. Primer PCR
53. Polimeraza Taq- polimeraz kodowana w genomie bakterii Thermus aquaticus
54. Termocykler- urządzenie używane w laboratorium do przeprowadzenia PCR.
55. Polimorfizm fragmentów restrykcyjnych- występowanie w populacji osobników danego gat.
DNA (deoksyrybonukleinowy kwas) różniącego się długością fragmentów odciętych enzymami
restrykcyjnymi
56. Hybrydyzacja kwasów nukleinowych- metoda badania kwasów nukleinowych oparta na
zdolności do tworzenia kompleksu dwuniciowego przez jednoniciowe, komplementarne fragmenty
kwasów nukleinowych.
57. Insulina-hormon peptydowy o działaniu ogólnoustrojowym, odgrywający rolę głównie w
metabolizmie węglowodanów, lecz także białek i tłuszczów.
58. GMO(genetically modified organisms) - rośliny i zwierzęta zawierające w swych komórkach
włączony do genomu gen obcego gatunku; uzyskiwane metodami inżynierii genetycznej.
59. Protoplasty- aktywna metabolicznie część komórki bakterii, grzyba lub rośliny czyli część komórki
bez ściany komórkowej.
60. Elektroporacja- chwilowa dezintegracja błony komórkowej za pomocą pola elektrycznego
podczas inkubacji komórek z egzogennym DNA.
61. Lipofekcja- opłaszczanie egzogennego DNA lipidami, które spontanicznie wnikają przez błonę
komórkową do cytoplazmy
62. Mikroiniekcja- wprowadzenie fragmentów DNA za pomocą mikropipety
63. Plazmid Ti- plazmid z bakterii Agrobacterium tumefaciens, wywołujący guzowatość korzeni roślin
64. Insulina ludzka- produkowany w trzustce polipeptyd zbudowany z 51 aminokwasów. Zbudowana
jest z dwóch łańcuchów: łańcuch A zawiera 21 reszt aminokwasów, a łańcuch B zawiera 30 reszt
aminokwasów. Oba łańcuchy połączone są dwoma mostkami disiarczkowymi, a w łańcuchu A
znajduje się jeszcze mostek S-S.
65. Insulina rekombinowana- insulina powstała w wyniku rekombinacji DNA w plazmidzie
66. Gensulin- lek stosowany w leczeniu cukrzycy
67. Zaproponowana przez Watsona i Cricka struktura dwuniciowej helisy DNA ma dwie cechy o
kluczowym znaczeniu w pełnieniu przez DNA funkcji nośnika informacji genetycznej
a) struktura ta jest kompatybilna z każdą sekwencją zasad (pary zasad mają zasadniczo taki sam
kształt)
b) sekwencja wzdłuż jednej nici determinuje całkowicie sekwencję drugiej nici (jako wynik
komplementarnośi).
A zatem jeśli dwuniciowa helisa ulega rozdzieleniu na dwie pojedyncze nici to każda z nich może
pełnić rolę matrycy w tworzeniu nowej komplementarnej nici poprzez specyficzne parowanie zasad.
PYTANIA OPISOWE:
Pyt. 1.
Ogólnie rzecz ujmując biotechnologia jest to świadczenie dóbr i usług z zastosowaniem metod
biologicznych. Inaczej biotech. Jest to integracja nauk przyrodniczych i inżynieryjnych w celu
osiągnięcia zastosowań organizmów, komórek lub ich części oraz molekularnych analogów dla
.pozyskania produktów i usług (definicja wg Europejskiej Federacji Biotechnologii). U podstaw
biotechn. leży wiele dziedzin nauki i techniki, jednak szczególne miejsce zajmuje biologia i genetyka
molekularna.
W nowoczesnej biotechnologii utożsamianej i zawężanej do inżynierii genetycznej, stosowane
procedury polegają przede wszystkim na przenoszeniu lub modyfikacji określonych, zdefiniowanych
genów pomiędzy rożnymi osobnikami, najczęściej pomiędzy rożnymi gatunkami za pomocą technik
laboratoryjnych. W klasycznej" hodowli również ma miejsce przenoszenie genów, np podczas
dokonywanych krzyżówek; jednakże, nikt nie wie jakie geny czy zespoły genowe zostały przeniesione
Ta nowoczesna" biotechnologia ściśle wiąże się z klasyczną", a zatem taki podział jest sztuczny,
wręcz niewłaściwy. Można natomiast wyróżnić inżynierię genetyczną, czyli zespół metod stosowanych
dla modyfikacji genomu, a zatem w celu zmian właściwości organizmu.
Rys historyczny
Okres I- Przedpasteurowski (korzenie biotechnologii)- od zarania ludzkości do poł. XIX w;
Spontaniczne procesy fermentacyjne, m.in. produkcja wina, piwa, octu, napojów mlecznych, chleba.
Osiągnięciem tego okresu było wprowadzenie techniki inokulacji - szczepienia kolejnych cykli
fermentacji częścią produktu, finalnego łub ubocznego.
Okres II przejściowy (początki nowych technologii mikrobiologicznych) IIpoł. XIX w., do lat 40- tych
XXw. Naukowe poznanie procesów mikrobiologicznych i wdrażanie nowych rozwiązań
technicznych; Opracowano i wdrożono do produkcji na skalę przemysłową etanol, butanol, metanol,
aceton, kwasy organiczne Zastosowanie do oczyszczania ścieków techniki złoża zraszanego, na
którym rozwijała się mikroflora degradująca składniki wód ściekowych. Opracowano pierwsze metody
biotransformacji mikrobiologicznej: sorbitolu do sorbozy, glukozy do kwasu glukonowego.
Okres III- Era nowoczesnej biotechnologii (po II wojnie światowej): Podokres 1 (1940-1970) Złota era
antybioz.- Opracowano nowe biotechnologie: ok. 100 antybiotyków w tym penicylina, kilkunastu
enzymów, kilku aminokwasów, dwóch witamin, nukleotydów, dekstranu, biotransformacje steroidów,
szczepionki wirusowe, białka paszowego pochodzenia drobnoustrojowego (SCP). Wprowadzenie
pierwszych technologii z zastosowaniem biokatalizatorów immobilizowanych. Podokres 2 (od 1970)
Współczesna biotechnologia - Narodziła się koncepcja manipulacji genami poza komórką. Nastąpił
rozwój metod rekombinaqi DNA in vitro i in vivo. Opracowano szereg nowych biotechnologii, m.in.
mikrobiologiczną produkcję insuliny, hormonów wzrostu, białek odpornościowych, wytwarzania
przeciwciał monoklonalnych, powszechne stosowanie metod klonowania i rozmnażania roślin in vitro
Pyt.2.
Etapy w opracowaniu procesu biotechnologicznego
1.Pozyskiwanie drobnoustrojów (skrining) Jest to poszukiwanie odpowiednich drobnoustrojów
prowadzących określony bioproces lub wytwarzających określony bioprodukt. (izolacja, ocena
przydatności, warunki przechowywania), charakterystyka materiału biologicznego (szybkość wzrostu,
szybkość przyswajania substratu, szybkość tworzenia produktu, szybkość oddychania)
2.Dobór warunków hodowli. Stworzenie warunków zapewniających szczepom max. produkcję (min.
Skład podłoża czyli zródła C,N,P i inne prekursory, pH, . potencjał 02, potencjał redox, , pH, dalej;
temp., natlenienie, sposób prowadzenia, hodowli.). Na tym etapie ustala się również metody
wyodrębniania i oczyszczania bioproduktów oraz warunki tych operacji: temp., ciśnienie, lepkość,
piana, pobór mocy.
3.Doskonalenie cech produkcyjnych szczepów. Zwiększenie potencjału genetycznego szczepu
w zakresie biosyntezy / biotransformacji określonego substratu w ilości przewyższającej potrzeby
własne drobnoustrojów od kilkuset (aa) do kilkudziesięciu tysięcy razy (witaminy). Stosuje się
następujące metody manipulacji genami: mutacje genetyczne, fuzję protoplastów, rekombinację DNA
in vitro Ponadto dzięki inż. genetycznej można konstruować szczepy, które syntezują bioprodukty,
których drobnoustroje macierzyste nigdy nie produkowały.
4.Optymalizacja bioprocesu. Jest ostatnim etapem laboratoryjnym. Jest konsekwencją
maksymalnego wykorzystania potencjału metabolicznego drobnoustrojów. Ustala się skład podłoża,
warunki jego mieszania i napowietrzania, kinetyki bioprocesu.
5.powiększenie skali- Przeniesienie opracowanej w laboratorium technologii do skali
półtechnicznej (fementatory o poj. 20-1000L)
6.Uruchomienie produkcji przemysłowej
Pyt.3.
Pyt.4.
Podstawy biochemiczne procesów technologii rekombinacyjnego DNA
a) schemat przepływu informacji genetycznej w komórce
b) monomery budujące DNA
DNA jest liniowym polimerem czterech monomerów (zasad A,G,T,C). Każdy nukleotyd składa się
reszty cukrowej deoksyrybozy i grupy fosforanowej i z zasady heterocyklicznej. Zasady
heterocykliczne- adenina, guanina, cytozyna, tymina.
c) istotne cechy budowy dwuniciowej helisy DNA
- Dwa helikalne łańcuchy polinukleotydowe oplatają wspólną oś Aańcuchy te biegną w przeciwnych
kierunkach
- Zasady purynowe i pirymidynowe znajdują sie wewnątrz, a fosforany i reszty deoksyrybozy na
zewnątrz helisy. Płaszczyzny zasad są prostopadle do osi helisy a płaszczyzny pierścieni cukrów są
ułożone prostopadle względem zasad.
- Średnica helisy wynosi 2.0 ma Odległość miedzy sąsiednimi zasadami mierzona wzdłuż osi helisy
wynosi 0.34nm. Zasady te są skręcone względem siebie pod katem 36. Na całkowity skr ęt helisy
przypada po JO nukleotydów w każdym łańcuchu, co daje okres powtarzalności równy 3.4 nm
- Dwa łańcuchy łączą się ze sobą wiązaniami wodorowymi między zasadami tworzącymi
komplementarne pary. Adenina zawsze tworzy parę z tyminą a guanina z cytozyną. Dodatkowo
strukturę stabilizują oddziaływania asocjacji warstwowej pomiędzy zasadą.
- Kolejność zasad w łańcuchu polinukleotydowym nie jest w żaden sposób ograniczona. ŚCISAE
OKREŚLONA SEKWENCJA ZASAD NIESIE INFORMACJE.
d) proces replikacji u bakterii
Polimeraza DNA I z E. coli wymaga prekursorów w postaci wszystkich czterech 5'-trifosforanów
deoksynukleozydów (dNTP) jonów Mg2*, matrycy DNA oraz odcinka starterowego zawierającego
wolną grupę 3'-OH. Synteza DNA przebiega w kierunku 5`-3'. Polimeraza DNA I wykazuje też
aktywność egzonukleazy3'-5' {sprawdzającą wierność replikacji) oraz aktywność egzonukleazy 5'-3\
Polimerazy DNA II i III z E. coli nit wykazują egzonukleotycznej aktywności 5`-3. Replikacja
rozpoczyna się w pojedynczym miejscu inicjacji (ori).przebiega dwukierunkowo i jest
semikonserwarywna. Każde oczko replikacyjne zawiera dwa widełki replikacyjne.Synteza QNA
przebiega w kierunku 5'->3' na każdej nici wyjściowego DNA. Na jednej z nici, o orientacji 3*->5ł (nic
wiodąca) nowo powstający DNA jest syntetyzowany w sposób ciągły. Na drugiej nici, o orientacji 5'-3'
{nić opózniona) synteza DNA przebiega w sposób nieciągły (skokowy) z tworzeniem się najpierw serii
krótkich fragmentów Okazaki, które następnie ulegają połączeniu. Do zainicjowania replikacji
konieczny jest starter RNA ( primer"), syntetyzowany przez polimerazę RNA zwaną prymazą. Starter
jest wydłużany przez polimerazę DNA III, która syntetyzuje DNA na obu matrycowych niciach. DNA, to
jest na nici wiodącej i opóznionej. Polimeraza. DNA I degraduje starter i zastępuje go odcinkiem DNA,
a następnie ligaza DNA łączy, końce DNA. Dwuniciową helisę DNA rozplatają helikazy, a białka
łączące się z jednoniciowym DNA (SSB) stabilizują jednoniciowy odcinek DNA podlegający replikacji.
Potrzebna też jest topoizomeraza DNA I, umożliwiająca rozplatanie DNA bez konieczności rotacyjnych
ruchów całego chromosomu. Topoizomeraza DNA II oddziela od siebie potomne cząsteczki kolistego
DNA powstałe w wyniku replikacji.
e) kod genetyczny i cechy kodu genetycznego
Kod genetyczny- jest zestawem reguł, która określają sposób, w jaki sekwencja nukleotydów w
mRNA zostaje przetłumaczona na sekwencję aminokwasów w polipeptydzie. Sekwencja nukleotydów
jest czytana trojkami. Kodony UAG, UOA, UAA nie specyfikują żadnego aminokwasu i są określane
jako kodony terninacyjne, czyli kodony stop". Kodon AUG koduje metioninę i działa również jako kodon
inicjujący, czyli start
Cechy kodu:
1) zdegenerowany- większość aminokwasów jest kodowana przez więcej niż jeden kodon;
2) Uniwersalny- jest taki sam w większości organizmów,;
3) Nienakładający się
4) Jednoznaczny
5) Bezprzecinkowy
6) Jest to kod trójkowy
Pyt.5.
Idea rekombinacji i klonowania DNA
Rekombinacja DNA:
a) izolowanie genów poprzez cięcie genomu danego organizmu enzymami restrykcyjnymi
b) otrzymywanie cDNA; wykorzystanie procesu odwrotnej transkrypcji
c) chemiczno- enzymatyczna syntez genów
Klonowanie DNA:
a) odpowiednie przygotowanie wektorowego DNA
b) przygotowanie interesującego nas genu, który chcemy powielić(sklonować) lub uzyskać jego
ekspresję
c) ligacja czyli połączenie genomowego i wektorowego DNA aby uzyskać zrekombinowaną
cząsteczkę DNA
d) transformacja komórki biorcy, analiza rekombinatów
Pyt. 6.
Podstawowe narzędzia stosowane w inżynierii genetycznej to enzymy:
a) endonukleazy przecinające DNA; w tym endonukleazy restrykcyjne = enzymy restrykcyjne
b) polimerazy DNA:
c) odwrotna transkryptaza-synteza DNA na matrycy RNA
d) Ligaza-enzym łączący kowalencyjnie odcinki DNA (w strukturze dwuniciowych)
Pyt.7.
Co to są i jak działają enzymy restrykcyjne?
Enzymy restrykcyjne umożliwiają rozcinanie DNA w specyficznych miejscach. Hybrydyzacjia kwasów
nukleinowych pozwala wykrywać specyficzne ich sekwencje. Określanie kolejności ułożenia
nukleotydów w cząsteczce DNA nazywamy sekwencjonowaniem DNA, jego przeprowadzenie jest
stosunkowo łatwe. Enzymy restrykcyjne (restryktazy) rozpoznają specyficzne sekwencje i rozcinają
DNA pozostawiając w miejscu rozcięcia kohezyjne lub tępe jego końce. Końce fragmentów
restrykcyjnych DNA można połączyć za pomocą ligazy, uzyskując w ten sposób nowe
zrekombinowane cząsteczki DNA.
Pyt.8.
Metody pozyskiwania DNA do zastosowań w technologii rekombinacyjnego DNA
Pyt. 9.
Wektory stosowane do klonowania DNA w bakteriach
a) wektory plazmidowe
- niektóre plazmidy występujące naturalnie w mikroorganizmach zostały przekształcone metodami
inżynierii genetycznej w wektory pozwalajace na wprowadzenie obcego DNA do komórki biorcy
- po transformacji bakterii wektorem zawierającym obce fragmenty DNA można wyselekcjonować linie
komórkowe czyli klony będące genetycznie czystymi kulturami wyprowadzonymi z pojedyńczej
komórki.
b) wektory bakteriofagowe- wektory typu insercyjnego i zastępczego
- w genomie bakteriofaga geny są zorganizowane w funkcjonalne waże grupy
- region środkowy bakteriofaga może być usunięty z genomu bakteriofaga nie powodując zmiany w
jego zdolności do litycznego rozwoju.
Z DNA faga można usunąć odcinek stanowiący ok. 30% genomu pozostawiając jego lewe i
prawe ramiona zawierające niezbędne geny w cyklu litycznym. Podobnie jak w wektorach
plazmidowych, do wektorów bakteriofagowych faga również wstawiono odpowiednie polilinkiery,
geny marlierowe, silne promotory itp.
c) kosmidy- sa sztucznie stworzonymi wektorami, powstałymi z połaczenia plazmidu i sekwencji
cos faga- (sekwencja odpowiedzialna za cyrkulizacje DNA). Kosmidy z wprowadzonym
insertem sa pakowane w kapsydy i sa wykorzystywane do zaka_enia komórek bakteryjnych.
W przeciwienstwie do faga _, kosmidy nie niszcza zainfekowanych komórek. Najprostszym
wektorem kosmidowym jest typowy plazmid z miejscem ori i markerem selekcyjnym,
zawierajacym dodatkowo sekwencje cos i odpowiednie miejsce restrykcyjne do klonowania.
Po trawieniu (cieciu) wektora odpowiednim enzymem restrykcyjnym i zligowaniu3
z docelowym insertem, kosmid pakowany jest do czasteczek fagowych. Po wprowadzeniu
wiekszego insertu do kosmidu wydłu_a sie czas jego replikacji oraz zmniejsza sie liczba jego
kopii. Kosmidy umo_liwiaja klonowanie długich fragmentów DNA (ok. 45 kpz).
Pyt.10.
Pyt.11.
Biblioteka genomowa człowieka w fagu
a) preparat zawierający wiele cząsteczek genomowego DNA najpierw poddaje się mechanicznej
fragmentacji lub częściowemi cięciu enzymami restrykcyjnymi
b) tą statystyczną mieszaninę wzajemnie nakładających się fragmentów rozdziela się
elektroforetycznie i izoluje z niej fragmenty o długości 15000 par zasad. Do końców fragmentów
przyłącza się syntetyczne linkiery, tworzy się kohezyjne końce i wprowadza się do wektora fagowego
c) zrekombinowanymi fagami infekuje się komórkami E-coli. Uzyskany w wyniku lizat zawiera
fragmenty DNA znajdujące się w na tyle dużej populacji zrekombinowanych fagów, że fragmenty w
sumie stanowią prawie kompletny genom
d) taka kolekcja fagów stanowi bibliotekę genomową
Pyt. 12
Wielokrotne powielanie DNA przez zastosowanie reakcji łańcuchowej polimeryzacji (PCR)
PCR to metoda enzymatycznego powielania kwasów nukleinowych ze współczynnikiem wzmocnienia
ok. 1000000. Cykl powielania polega na:
a) denaturacji cieplnej powielanego DNA
b) renaturacji- syntetyczne startery tworzą hybrydy z jednoniciowymi cząsteczkami DNA
c) elongacji czyli dodaniu polimerazy i substratowych trifosforanów 2 - deoksynukleozydów (dNT) i
przeprowadzeniu reakcji polimeryzacji
Jeden cykl w zależności od potrzeby może trwać od kilkudziesięciu sekund do kilku minut.
Specyficzność procesu powielania wynika z oddziaływania między polimerami, które tworzą wiązania
wodorowe z łańcuchami jednoniciowego DNA. Niespecyficzność wiązania można eliminować stosując
primery o odpowiedniej długości i stężeniu, dostatecznie wysoką temperaturą renaturyzacji.
Pyt.13.
Pyt.14.
Nowoczesna biotechnologia w przemyśle spożywczym
a) główne cele dla których modyfikuje się rośliny
- odporność na herbicydy
- odporność na choroby przenoszone przez wirusy, grzyby, bakterie
- odporność na szkodniki
- poprawa cech jakościowych i użytkowych
- uodpornienie na działanie niekorzystnych warunków środowiska
b) przykład procedury genetycznego modyfikowania roślin
- wybrany fragment DNA zostaje połączony z DNA organizmu dawcy. Wykonuje się to przy pomocy
enzymów restrykcyjnych
- wycięty fragment DNA zostaje połączony z DNA wektora, który posiada umiejętność przenoszenia
kodu genetycznego do komórek innych organizmów. Wektorami mogą być organizmy lub plazmidy
posiadające zdolność przenoszenia własnych genów oraz genów do nich dołączonych
- fragment DNA przenoszony przez wektor wbudowany w DNA biorcy
c) argumenty za i przeciw
ZA:
- rośliny transgeniczne są zazwyczaj bardziej odporne na niekorzystne warunki środowiska.
Poprawiają się też ich cechy użytkowe- smak, wygląd, skład chemiczny
- względy ekonomiczne- rośliny GMO odznaczają się lepszym smakiem, ładniej wyglądają, są bardziej
dorodne
- możliwość zmniejszonego użycia chemicznych środków ochrony roślin, może prowadzić do
obniżenia kosztów produkcji, a tym samym do obniżenia cen
- odporność na trudne warunki wzrostu oraz potencjalnie wyższe plony, mogą pomóc w eliminacji
problemu głodu w krajach Trzeciego Świata
PRZECIW:
- szkodliwość upraw transgenicznych względem środowiska naturalnego oraz konsumentów
- nie jest dokładnie znany wpływ GMO na środowisko- szczególnie rośliny zawierające geny
odporności na herbicydy, co może prowadzić do powstania superchwastu odpornego na działanie
środków ochrony roślin
- zbyt duże ujednolicenie upraw
- bezpośrednia szkodliwość produktów GMO względem organizmu ludzkiego
Pyt.15.
Produkcja insuliny technologią zrekombinowanego DNA
a) ekstrakcja z ludzkich trzustek
b) chemiczna synteza via indywidualne aminokwasy
c) transformacja świńskiej insuliny semi-synteza
d) produkcja metodami inżynierii genetycznej SEMI-SYNTEZA
e) ekstrakcja insuliny świńskiej z zamrożonych tkanek
f) oczyszczanie insuliny świńskiej
g) biochemiczna transformacja (insulina świńska ma alaninę w B30 zamiast treoniny). Transformację
wykonuje się wobec trypsyny przy dużym nadmiarze treoniny (najlepsze rezultaty daje ester t-
butylowy)
h) oczyszczanie ludzkiej insuliny aby ograniczyć do minimum zawartość proinsuliny
i) ostateczna foemulacja insuliny
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
Lab 5 Biotechnologia pytania wykrywanie obecnosci enzymowBIOTECHNOLOGIA ściąga i pojęciabiotech pytaniabiochemia pytania biotechnologiaPytania Biotechnologia Immobilizacja drozdzypytania na egz z biotechnologiiPytania Biotechnologia Lab2 fosforolizaPytania hydroliza sacharozy biotechnologia lab 4pytania biotechnologia egzReligia Pytania o latarnię mojego sercaPytania z witamin Siemianpytania2009cz1 testWYKŁAD 1 Wprowadzenie do biotechnologii farmaceutycznejPKC pytania na egzamin2009 pytania testowepytania byrdy I terminpatomorfologia pytania egzamin opisowywięcej podobnych podstron