ANDROLOGIA WETERYNARIA W PRAKTYCE dr n. wet. Marta Siemieniuch, dr n. wet. WiesÅ‚aw Bielas ZakÅ‚ad Immunologii Rozrodu, Instytut Rozrodu ZwierzÄ…t i BadaÅ„ Å»ywnoÅ›ci PAN, Olsztyn Nasienie kota domowego METODY OCENY Znajomość fizjologii i patologii rozrodu wad plemników a ich ruchliwoÅ›ciÄ… oraz kotów stanowi coraz potężniejsze wy- stwierdzono, że gamety kocurów z du- Streszczenie zwanie dla lekarzy weterynarii. Liczeb- żym odsetkiem wad morfologicznych Coraz powszechniej mamy do czynie- ność kotów jako zwierzÄ…t utrzymywa- majÄ… mniejszÄ… zdolność penetracji oocy- nia z problemami w rozrodzie kotów nych w charakterze towarzysza w domu tów in vitro, w porównaniu z plemnika- rasowych, a natura tego zjawiska jest oraz zwierzÄ™cia, z którym wÅ‚aÅ›ciciel wiÄ…- mi pochodzÄ…cymi z nasienia o niskim wieloczynnikowa. WystÄ…pieniu tych że plany hodowlane, wymusza niejako wskazniku wad (8). Uzyskanie potom- problemów sprzyja wykorzystanie nie- na lekarzach konieczność dobrego opa- stwa w wyniku krycia kocurem, którego wielkiej liczby zwierzÄ…t do rozrodu i za- nowania warsztatu zwiÄ…zanego z rozro- nasienie reprezentuje gorszÄ… jakość, jest wężanie genetycznego zróżnicowania dem kotów. W Polsce bardzo popularne możliwe, jakkolwiek znalezienie odpo- populacji. obecnie sÄ… wystawy kotów i wiele osób, wiedzi na pytanie o przyczyny obniżonej Ocena nasienia kota napotyka dwa za- które nie może sobie pozwolić na posia- zapÅ‚adnianoÅ›ci samic jest bardziej skom- sadnicze problemy. Pierwszym z nich danie psa, decyduje siÄ™ na kupno kota ra- plikowane, aniżeli stwierdzenie caÅ‚kowi- jest niewielka objÄ™tość ejakulatu, wy- sowego. Wydaje siÄ™, że era kastracji ko- tej bezpÅ‚odnoÅ›ci samca (5). noszÄ…ca 0,034-0,04 ml podczas po- tów i kotek oraz odraczania rui jako je- Zaawansowane zmiany w ejakulatach bierania na sztucznÄ… pochwÄ™. Druga dynej dziaÅ‚alnoÅ›ci lekarskiej zwiÄ…zanej kotów oprócz teratozoospermii to azo- niedogodność zwiÄ…zana jest z moż- z rozrodem u tego gatunku należy już do ospermia (brak plemników w nasieniu), liwoÅ›ciÄ… pobrania ejakulatu od kota. przeszÅ‚oÅ›ci. Coraz powszechniej mamy ciężka oligospermia (bardzo niska kon- IstniejÄ… trzy główne metody pobiera- do czynienia z problemami w rozrodzie centracja), astenozoospermia (komór- nia nasienia od kocura: pobieranie na- kotów rasowych, a natura tego zjawiska ki nieruchliwe), (1). Zaobserwowano, że sienia przy pomocy sztucznej pochwy, jest wieloczynnikowa. stosunek plemników z wadami morfolo- elektroejakulacja oraz pokastracyjne W przypadku kotów przeznaczo- gicznymi do gamet prawidÅ‚owych może pÅ‚ukanie najÄ…drzy. nych do hodowli pobieranie nasienia siÄ™ wahać w różnych ejakulatach pocho- na sztucznÄ… pochwÄ™ wydaje siÄ™ najroz- dzÄ…cych od tego samego kocura, z tego SÅ‚owa kluczowe sÄ…dniejszym sposobem. Problemem jest wzglÄ™du jednokrotne pobranie nasienia kot, badanie andrologiczne, ocena na- jednak trudność w przyuczeniu samca do od danego osobnika i wykonanie na jego sienia oddawania nasienia tÄ… metodÄ…. podstawie spermiogramu nie jest obiek- Podczas oceny plemników kota prze- tywne (2). Abstract prowadza siÄ™ przede wszystkim badania W chwili obecnej metodyka oceny ja- należące do uzupeÅ‚niajÄ…cych metod oceny koÅ›ci nasienia jest bardzo szeroka, a jej Nowadays breeding pure-breed cats is nasienia. OkreÅ›la siÄ™ koncentracjÄ™ plem- wachlarz obejmuje wykorzystanie me- presenting an increasing problem of mul- ników, ich ruchliwość oraz odsetek wad tod manualnych, jak również technik tifactorial background. Breeding a small morfologicznych. Standardowo do oceny wykorzystujÄ…cych użycie nowoczesne- number of animals and limiting a gene- budowy morfologicznej plemników sto- go sprzÄ™tu i mniejszych nakÅ‚adów pracy tic diversity of the population favour the suje siÄ™ zróżnicowane barwienia, które czÅ‚owieka. Standardowo do oceny budo- occurrence of this problem. umożliwiajÄ… uwidocznienie i dokÅ‚adnÄ… wy morfologicznej plemników stosuje siÄ™ The evaluation of semen in toms is hin- ocenÄ™ poszczególnych wad morfologicz- zróżnicowane barwienia, które umożli- dered by two major factors. The minor nych. Plemniki przedstawicieli rodziny wiajÄ… uwidocznienie i dokÅ‚adnÄ… ocenÄ™ amount of ejaculate, i.e. 0,034-0,4 ml, Felidae charakteryzujÄ… siÄ™ znacznym od- poszczególnych wad morfologicznych. obtained while collecting it into an ar- setkiem wad. W przypadku kota domo- Wykonanie rozmazu z nasienia i zabar- tificial vagina is the first disadvantage. wego odsetek plemników prawidÅ‚owych wienie jednÄ… z wielu dostÄ™pnych tech- The second one is connected with the techniques of collecting the ejaculate po wypÅ‚ukaniu z najÄ…drzy oscyluje wo- nik pozwala wyróżnić nastÄ™pujÄ…ce wady: from the tom. There are three key me- kół 60-70%. główki gruszkowate, o nieprawidÅ‚owym thods: collecting into the artificial vagi- Do stwierdzenia, że niska różnorod- konturze, zwężone u podstawy, wÄ…skie, na, electroejaculation and post-neute- ność genetyczna przyczynia siÄ™ do wzro- niedorozwiniÄ™te, luzne albo podwój- ring epididymis lavage. stu plejomorfizmu w nasieniu, skut- ne główki, mikro- i makrocefaliÄ™; część kujÄ…cego pogorszeniem wskazników barwników umożliwia zaobserwowanie Key words rozrodu, przychyla siÄ™ wielu naukow- wad i zmian akrosomów (5, 9). ców zajmujÄ…cych siÄ™ rozrodem Felidae We wstawce można wykryć takie nie- Cat, andrological examination, semen (3, 5, 8, 10, 11, 17). Wykazano istnienie prawidÅ‚owoÅ›ci, jak zaÅ‚amana, podwójna evaluation ujemnej korelacji pomiÄ™dzy odsetkiem wstawka, nieregularne uÅ‚ożenie mito- MARZEC-KWIECIEC " 2/2007 66 www.weterynaria.elamed.pl ANDROLOGIA WETERYNARIA W PRAKTYCE Ryc. 1. Ryc. 2. Ryc. 3. Ryc. 4 Ryc. 1. Podczas krycia niekiedy udaje siÄ™ pobrać nasienie od kocura na sztucznÄ… pochwÄ™. Ryc. 2. JednÄ… z metod stosowanych podczas pobierania nasienia jest użycie elektroejakulatora. Ryc. 3. Obraz prawidÅ‚owych plemników ejakulatu kocura. Ryc. 4. PrzykÅ‚ady wad plemników: plemniki z zawiniÄ™tÄ… i zapÄ™tlonÄ… witkÄ… chondriów dajÄ…ce obraz wstawki w for- progresywnym. ObiektywnÄ… i nowocze- BarwÄ™ nasienia kota można okreÅ›lić mie korkociÄ…gu. Klasyfikacja wad witki snÄ… metodÄ… oceny ruchliwoÅ›ci gamet sta- jako mlecznÄ…, biaÅ‚awÄ…, przy niższej kon- jest nastÄ™pujÄ…ca: pojedyncze/podwójne nowi system komputerowej analizy mor- centracji bardziej przezroczystÄ…. Podczas zagiÄ™cie witki, pÄ™tla witki i witka podwój- fologii i ruchliwoÅ›ci plemników, który uzyskiwania nasienia metodÄ… elektroeja- na. W preparatach można zauważyć tak- okreÅ›la różne parametry ruchu komó- kulacji spotkać można żółtawe zabarwie- że kroplÄ™ cytoplazmatycznÄ… w poÅ‚ożeniu rek (11, 23). Odsetek ruchliwoÅ›ci plem- nie pochodzÄ…ce od moczu (12). bliższym lub dalszym (3, 5, 17). ników w ejakulatach jest w dużej mie- Plemniki kota uzyskuje siÄ™ poprzez Ze wzglÄ™du na wpÅ‚yw wad morfolo- rze uzależniony od metody pobierania pokastracyjne lub poÅ›miertne pÅ‚ukanie gicznych plemników na pÅ‚odność, zo- nasienia. U osobników normozoosper- najÄ…drzy, pobierajÄ…c ejakulat na sztucz- staÅ‚y one podzielone u kota na pierwot- micznych ruchliwość plemników w eja- nÄ… pochwÄ™ lub metodÄ… elektroejakula- ne i wtórne (5). Wady pierwotne powstajÄ… kulatach pobieranych metodÄ… elektroeja- cji (2, 3, 4, 5, 13, 14, 21, 22). Najpow- w trakcie spermatogenezy, w kanalikach kulacji lub na sztucznÄ… pochwÄ™ charak- szechniejszÄ… metodÄ… otrzymywania nasiennych jÄ…der i majÄ… znaczny wpÅ‚yw teryzuje siÄ™ dużą zmiennoÅ›ciÄ… i waha siÄ™ peÅ‚nych ejakulatów kota jest zastoso- na pÅ‚odność (1, 2, 4). Należą do nich de- od 56 do 85% (3, 5, 19). wanie elektroejakulacji, przeprowadza- fekty główki i wstawki. Wady wtórne po- Kolejne parametry okreÅ›lajÄ…ce jakość nej w peÅ‚nym znieczuleniu, przy użyciu wstajÄ… podczas dojrzewania i transportu nasienia i jego potencjalne wykorzysta- stymulatora bodzców elektrycznych plemników przez najÄ…drze i nasieniowo- nie w technikach wspomaganego rozro- oraz elektrody doodbytniczej. Otrzy- dy. Zalicza siÄ™ do nich obecność kropli du to: objÄ™tość, koncentracja plemników mywanie nasienia za pomocÄ… sztucznej cytoplazmatycznych, uszkodzenia akro- w jednostce objÄ™toÅ›ci oraz caÅ‚kowita licz- pochwy jest trudnym i czasochÅ‚onnym somów, zaÅ‚amania i zawiniÄ™cia witki. Ich ba plemników w ejakulacie. przedsiÄ™wziÄ™ciem, wymagajÄ…cym od- obecność w nasieniu w mniejszym stop- Liczba mÄ™skich komórek rozrodczych powiedniego treningu samca. Jedynie niu upoÅ›ledza pÅ‚odność samca (2, 3, 5). w caÅ‚ym ejakulacie kocura wynosi, pod- okoÅ‚o 20% kocurów udaje siÄ™ przyuczyć Zazwyczaj w celu oceny prawidÅ‚owoÅ›ci czas pobierania na sztucznÄ… pochwÄ™, do oddawania nasienia na sztucznÄ… po- budowy mÄ™skich komórek rozrodczych 57-61 x 106 lub 12-30 x 106, po zastoso- chwÄ™ (5, 21, 22). stosuje siÄ™ jeden rodzaj barwienia (5). waniu elektroejakulacji (13, 22). Nato- Do badaÅ„ naukowych oraz procedur Rozmaz z kropli nasienia barwi siÄ™ nastÄ™- miast po przeprowadzeniu owariohiste- mrożenia można wykorzystać plem- pujÄ…cymi barwnikami: eozynÄ… i nigrozy- rektomii, 30 minut po kryciu, uzyskano niki wypÅ‚ukane z najÄ…drzy po kastra- nÄ…, kombinacja tych barwników umoż- 4,5 x 104 plemników wypÅ‚ukanych z dróg cji chirurgicznej lub w krótkim czasie liwia przede wszystkim ocenÄ™ żywotno- rodnych kotki. od Å›mierci zwierzÄ™cia. Podczas mani- Å›ci plemników (5, 11); eozynÄ… z zieleniÄ… Koncentracja gamet w nasieniu róż- pulacji zwiÄ…zanych z nasieniem należy FCF (11); różem bengalskim i 1-procen- ni siÄ™ w zależnoÅ›ci od metody pobra- pamiÄ™tać o utrzymywaniu temperatury towÄ… zieleniÄ… FCF w 40% etanolu w kwa- nia i wynosi 1730 x 106/ml przy pobie- 37-38°C wszystkich materiałów i roz- sie cytrynowym (11, 15); fuksynÄ… karbo- raniu na sztucznÄ… pochwÄ™ oraz 168-361 rzedzalników majÄ…cych kontakt z nasie- lowÄ… (5); Spermac"! (18); barwnikiem x 106/ml przy zastosowaniu elektroeja- niem, aby przeciwdziaÅ‚ać szokowi ter- Giemsy (21, 22). NastÄ™pnie przeprowadza kulacji (13, 22). micznemu. NajÄ…drza odpreparowuje siÄ™ siÄ™ ocenÄ™ spermiogramu w mikroskopie Istotnym problemem utrudniajÄ…cym od jÄ…der, wielokrotnie nacina siÄ™ i inku- Å›wietlnym pod powiÄ™kszeniem 1000- wykorzystanie nasienia kota jest maÅ‚a ob- buje z rozrzedzalnikiem. Plemniki prze- -krotnym, liczÄ…c odsetek poszczególnych jÄ™tość ejakulatu, wynoszÄ…ca 0,034-0,04 ml mieszczajÄ… siÄ™ do roztworu i po zastoso- wad na 100 lub 200 komórek. Spotyka siÄ™ podczas pobierania na sztucznÄ… pochwÄ™ waniu odpowiednich procedur mogÄ… być metodÄ™ utrwalania plemników w 1% glu- i nieco wiÄ™ksza, 0,076-0,22 ml, przy za- użyte w technikach wspomaganego roz- taraldehydzie, w celu wizualizacji kropli stosowaniu elektroejakulacji (20, 21). Jed- rodu po konserwacji w stanie pÅ‚ynnym, cytoplazmatycznej w poÅ‚ożeniu proksy- nakże ejakulaty pobierane metodÄ… elek- mrożonym, bÄ…dz natychmiast po wyizo- malnym i dystalnym w mikroskopie kon- troejakulacji cechujÄ… siÄ™ gorszÄ… jakoÅ›ciÄ… lowaniu z tkanki (7, 15, 16). trastowo-fazowym (5). Jeżeli plemnik wy- nasienia, mimo wiÄ™kszej objÄ™toÅ›ci, bÄ™dÄ…- kazuje wiÄ™cej niż jednÄ… wadÄ™, należy kla- cej wynikiem hiperstymulacji dodatko- PiÅ›miennictwo 1. Axnér E., Ström B., Linde-Forsberg C.: Re- syfikować je osobno (5). wych gruczołów pÅ‚ciowych. Obserwuje productive disorders in 10 domestic male cats. OcenÄ™ ruchliwoÅ›ci plemników prze- siÄ™ wówczas spadek ruchliwoÅ›ci plemni- J Small Anim Pract , 1996, 37, 394-401. prowadza siÄ™ w mikroskopie kontrasto- ków oraz wzrost odsetka form nieprawi- 2. Axnér E., Ström B., Linde-Forsberg C.: wo-fazowym lub Å›wietlnym, rozpatrujÄ…c dÅ‚owych morfologicznie (3, 6, 22). Nato- Sperm morphology is better in the second eja- caÅ‚kowity odsetek plemników ruchli- miast pH nasienia kota waha siÄ™ miÄ™dzy culate than in the first in domestic cats elec- wych oraz tych poruszajÄ…cych siÄ™ ruchem 6,6 a 8,8 (Å›rednio 7,4), (20, 22). MARZEC-KWIECIEC " 2/2007 68 www.weterynaria.elamed.pl WETERYNARIA W PRAKTYCE ANDROLOGIA troejaculated twice during the same period of 10. Luvoni G.C., Kalchsmidt E., Leoni S., ding and removing cryoprotectant. Cryobio- anesthesia. Theriogenology , 1997, 47, Ruggiero C.: Conservation of feline semen. logy , 2002, 44, 288-300. 929-934. Part I: Cooling and freezing protocols. J. Fel. 18. Schäfer S., Holzmann A.: The use of trans- 3. Axnér E., Ström H.B., Linde-Forsberg Med. Surg. , 2003, 5, 203-208. migration and Spermac"! stain to evaluate C.: Morphology of spermatozoa in the cauda 11. Luvoni G.C., Kalchsmidt E., Marinoni G.: epididymal cat spermatozoa. Anim. Reprod. epididymis before and after electroejaculation Conservation of feline semen. Part II: Cold-in- Scie. , 2000, 59, 201-211. and a comparison with ejaculated spermato- duced damages on spermatozoal fertilizing abi- 19. Silva A.R., Morato R.G., Silva L.D.M.: The zoa in the domestic cat. Theriogenology , lity. J. Fel. Med. Surg. , 2003, 5, 257-263. potential for gamete recovery from non-dome- 1998, 50, 973-979. 12. Pineda M.H., Dooley M.P.: Effects of volta- stic canids and felids. Anim. Reprod. Scie. , 4. Axnér E., Linde-Forsberg C., Einarsson ge and order of voltage application on seminal 2004, 81, 159-175. S.: Morphology and motility of spermatozoa characteristics of electroejaculates of the do- 20. Sojka N.J., Jennings L.L., Hamner C.E.: from different regions of the epididimal duct in mestic cat. Am J Vet Res , 1984, 45, 1520- Artificial insemination in the cat (Felis catus). the domestic cat. Theriogenology , 1999, -1525. Lab. Anim. Care , 1970, 20, 198-204. 52, 767-778. 13. Platz C.C., Seager S.W.J.: Semen collec- 21. Sojka N.J.: Feline semen collection, evaluation 5. Axnér E., Linde-Forsberg C.: Semen col- tion by electroejaculation in the domestic cat. and artificial insemination. W: Current The- lection and assessment, and artificial insemi- J Anim Vet Med Assoc , 1978, 173, 1353- rapy in Theriogenology 1., W.B. Saunders nation in the cat. http://www.ivis.org, com- -1355. Co; Philadelphia, 1980, 848-850. munications date: 15.09.2002 14. Platz C.C., Wildt D.E., Seager W.J.: Pre- 22. Sojka N.J.: Management of artificial breeding 6. Dooley M.P., Pineda M.H.: Effect of method gnancy in the domestic cat after artificial inse- in cats. W: Current Therapy in Therioge- of collection on seminal characteristics of the mination with previously frozen spermatozoa. nology 2., W.B. Saunders Co; Philadel- domestic cat. Am. J. Vet. Res. , 1986, 47, J. Reprod. Fertil. , 1978, 52, 279-282. phia, 1986. 805-808. 286-292. 15. Pope C.E., Turner J.L., Quatman S.P., 23. Verstegen J., Iguer-Ouada M., Onclin K.: 7. Farstad W.: Current state in biotechnology in Dresser B.L.: Semen storage in the domestic Computer assisted semen analyzers in androl- canine and feline reproduction. Anim. Re- felid: A comparison of cryopreservation me- ogy research and veterinary practise. The- prod. Scie. , 60-61 (2000)375-387. thods and storage temperatures. Biol. Re- riogenology , 2002, 57, 149-179. 8. Howard J.E., Donoghue A.M., Johnston prod. , 1991, 44, suppl. 1, str. 177, abst. L.A.: Zona pellucida filtration of structually 16. Pope C.E.: Embryo technology in conserva- dr n. wet. Marta Siemieniuch abnormal spermatozoa and reduced fertiliza- tion efforts for endangered felids. Therioge- ZakÅ‚ad Immunologii Rozrodu, tion in teratospermic cats. Biol. Reprod. , nology , 2000, 53, 163-174. Instytut Rozrodu ZwierzÄ…t 1993, 49, 131-139. 17. Pukazhenthi B., Spindler R., Wildt D., i BadaÅ„ Å»ywnoÅ›ci PAN, 9. Little S.: Uncovering the cause of infertili- Bush L.M., Howard J.: Osmotic properties ul Bydgoska 5, Olsztyn ty in queens. Vet. Med. , 2001, 96 557- of spermatozoa from felids producing different e-mail: msiemieniuch@interia.pl -568. proportions of pleiomorphism: influence of ad-