CZYNNIKI MODYFIKUJCE
STRUKTUR DNA
20. Iwona śak, Paweł Niemiec
Czynniki chemiczne lub fizyczne o charakterze mutagennym są niejedno-
rodną grupą. Wszystkie reagują bezpośrednio z DNA, wprowadzając modyfikacje
w strukturze nukleotydów, le\ące u podstaw zmian sekwencji zasad azotowych.
Chemicznymi czynnikami modyfikującymi strukturę DNA są: kwas azotawy, hy-
droksylamina, związki alkilujące, analogi zasad azotowych, barwniki akrydynowe,
policykliczne węglowodory aromatyczne oraz reaktywne formy tlenu. Charakter
mutagenny wykazują niektóre leki, np.: pewne klasy cytostatyków, antybiotyków
oraz leków psychotropowych. Do fizycznych czynników mutagennych zalicza się
promienie X, promienie ą, , ł, UV oraz hipertermię.
Chemiczne czynniki modyfikujące DNA
Kwas azotawy jest związkiem, który deaminuje cytozynę, adeninę i guaninę
w DNA. Deaminacja cytozyny przekształca ją w uracyl. Deaminacja kwasem azo-
tawym adeniny przekształca ją w hipoksantynę.
NH2
O
N
N
kwas azotawy
deaminacja
O N
O N
H
H
cytozyna
uracyl
NH2
O
N
N
kwas azotawy
N
N
H
deaminacja
N
N N
H N
H
adenina hipoksantyna
Deaminacja kwasem azotawym guaniny przekształca ją w ksantynę.
346
O
O
N
N
HN
kwas azotawy HN
deaminacja
N
N
H2N N
O N
H
H
H
guanina
ksantyna
Jeśli modyfikacje te zostaną utrwalone podczas replikacji, wówczas w DNA
ma miejsce zamiana zasad azotowych GC na AT, gdy nastąpiła deaminacja typu
cytozynauracyl lub zamiana zasad azotowych AT na GC, gdy miała miejsce
deaminacja typu adeninahipoksantyna, lub zasad azotowych GC na AT, gdy za-
szła deaminacja typu guaninaksantyna w DNA.
Hydroksylamina jest związkiem, który w układzie in vitro reaguje z cyto-
zyną w DNA, przekształcając ją w związek podobny do uracylu, w konsekwencji
mo\e prowadzić to do tranzycji CT.
N
OH
O O
N
CH2CH3
CH3 S O CH3 H2N C N
N O
HONH
O
hydroksylamina etylonitrozomocznik
metylosulfonian metylu
Do związków alkilujących nale\ą między innymi sulfonian dietylowy, sul-
fonian etylometylowy oraz metylosulfonian metylu, etylonitrozomocznik i diepok-
sybutan. Obecność grup metylowych, etylowych i innych w tych związkach, po-
woduje alkilację zasad azotowych. Największą wra\liwość na alkilację w ą-helisie
wykazuje atom azotu (N7) guaniny. W dalszej kolejności mogą ulegać alkilacji
atomy azotu guaniny (N1), adeniny (N1 i N3) i cytozyny (N3). Pod wpływem tych
związków obserwuje się liczne tranzycje i transwersje typu: ATTA, ATGC,
GCCG, GCAT, GCTA. Analogiczny mechanizm działania (z mechani-
zmem bifunkcyjnych związków alkilujących) wykazują niektóre pochodne platyny
(Pt), wykorzystywane w terapii przeciwnowotworowej. Do grupy tej nale\y mię-
dzy innymi cis-diamino-dichloroplatyna (cDDP).
H3N
Cl- NH3
Cl-
Pt
Pt
NH3
Cl- Cl- NH3
trans - diamino dichloroplatyna
-
cis -diamino -dichloroplatyna
Rezultatem budowy cDDP (centralnie poło\ony atom Pt z dwiema reaktyw-
nymi grupami Cl-) jest skłonność do łatwej zamiany ligandów w środowisku wod-
nym i do formowania kompleksów z grupami funkcyjnymi o ujemnym ładunku,
czyli z grupami nukleofilowymi w cząsteczkach substancji biologicznie czynnych.
347
Mo\na wyró\nić dwa rodzaje oddziaływań tego cytostatyku z DNA. Są to mono-
funkcyjne oraz bifunkcyjne reakcje związku. Efekt monofunkcyjny dotyczy rzad-
kich przypadków, kiedy jeden z atomów chloru unieczynniany jest przez np. H2O
(ryc. a) lub białko niehistonowe ryc. b (około 0,15% wszystkich adduktów
cDDP DNA).
a) b) c) d)
Bifunkcyjne działanie cis-platyny jest znacznie częściej spotykane i silniej-
sze od monofunkcyjnego. Reakcja wymiany obu ligandów mo\e mieć dwojaki
charakter: jeden z nich polega na międzyniciowym wiązaniu krzy\owym z zasa-
dami nale\ącymi do dwóch ró\nych nici (ryc. c), stanowi mniej ni\ 1% całkowitej
ilości adduktów cDDP DNA. Drugi, najwa\niejszy pod względem terapeutycz-
nym, polega na wewnątrzniciowym wiązaniu krzy\owym z zasadami azotowymi
nale\ącymi do tej samej nici (ryc. d), stanowi około 98% wszystkich adduktów
cDDP DNA. Odległość między dwoma labilnymi ligandami Cl- w cząsteczce
cDDP jest rzędu 0,33 nm, niemal taka sama, jak odległość między dwiema sąsia-
dującymi zasadami w ą-helisie. Stąd w krzy\owych wiązaniach wewnątrznicio-
wych dominują oddziaływania typu 1,2-wiązań wewnątrzniciowych. Oddziaływa-
nia te nie występują w izomerze trans-DDP, u którego odległość między dwoma
labilnymi ligandami Cl- równa się 0,45 nm. Trans-diamino-dichloroplatyna nie
wykazuje więc właściwości genotoksycznych.
Analogi zasad azotowych są strukturalnie podobne do zasad występujących
w cząsteczce DNA, dzięki temu mogą być rozpoznawane i wbudowywane podczas
T A C G T T G
A T G C A A C
5Bu
T A C G B T G
A T G C A A C
O
zmiana
tautomeryczna
Br
HN T A C G B T G
A T G C G A C
O N
replikacja
H
5
-bromouracyl
5-bromouracyl T A C G C T G
( 5
)
Bu
5Bu
A T G C G A C
348
replikacji przez polimerazę DNA. Powodują one mutacje na skutek niewłaściwego
parowania zasad. Przykładami tych związków mogą być 2-aminopuryna i 5-bro-
mouracyl. Drugi z tych związków jest analogiem tyminy i normalnie ulega paro-
waniu z adeniną. 5-bromouracyl mo\e ulec przesunięciu tautomerycznemu, na
skutek którego ulega parowaniu z guaniną. Po replikacji wyjściowa para TA zosta-
je zastąpiona przez GC.
Barwniki akrydynowe wnikają (interkalują) między zasady azotowe w łań-
cuchu DNA, powodując ich rozsunięcie. Do grupy tej nale\ą między innymi oran\
akrydyny, proflawina oraz akryflawina.
Deformacje matrycy DNA, spowodowane interkalacją barwników akrydy-
nowych, wywołują błędy replikacji, prowadzące w rezultacie do delecji lub insercji
pojedynczych par nukleotydów, a w dalszej konsekwencji do mutacji typu zmiany
ramki odczytu.
NH2
NH2
H2N H2N
N N
proflawina
CH3
flawina
akry
Interkalatorem jest te\ bromek etydyny. Cząsteczka tego związku zawie-
ra cztery pierścienie o rozmiarach zbli\onych do pary zasad puryna-pirymidyna.
Mechanizm działania bromku etydyny jest podobny do mechanizmu działania
barwników akrydynowych. Związek ten wykorzystuje się powszechnie jako barw-
nik DNA, stosowany w elektroforezie agarozowej. Pod wpływem UV związany
z DNA bromek etydyny emituje światło o zabarwieniu pomarańczowym.
NH2
N+ CH3Br-
H2N
bromek etydyny (EtBr)
Wielopierścieniowe węglowodory aromatyczne, takie jak np. benzo[a]pi-
ren czy benzo[a]antracen tworzą addukty z DNA. Są to produkty reakcji przyłą-
czania (addycji) atomów lub cząsteczek (w tym przypadku wielopierścieniowych
węglowodorów aromatycznych) do cząsteczki innego związku (w tym przypadku
DNA).
349
O
cytochrom P450
aktywacja metaboliczna
HO
OH
benzo[a]piren
,
7 8-diol- 9 10-tlenek
,
Wielopierścieniowe węglowodory aromatyczne zaliczane są do promutage-
nów, czyli związków, które stają się właściwymi mutagenami dopiero po metabo-
licznym przekształceniu w organizmie. W aktywacji metabolicznej często uczest-
niczy kompleks cytochromu P450. Podobne związki występują w dymie papiero-
sowym, kawie, herbacie oraz przede wszystkim w pokarmach pochodzenia zwie-
rzęcego. Najwięcej znajduje się ich w tzw. czerwonym mięsie.
Addukty z DNA tworzą tak\e niektóre heterocykliczne aminy aromatycz-
ne, powstające równie\ podczas obróbki termicznej białkowych produktów \yw-
nościowych, szczególnie podczas długotrwałego sma\enia mięsa w temperaturze
powy\ej 150C, skutkiem pirolizy aminokwasów (glicyna, kwas glutaminowy,
tryptofan, fenyloalanina). Dzięki łączeniu się z kreatyniną i cukrem tworzą muta-
genne heterocykliczne aminy aromatyczne, np:. 3-amino-1-metylo-5H-pirydo
[4,3-b]indol (Trp-P-2), 2-amino-6-metylodipirydo [1,2-a:3 ,2 -d]indol (Glu-P-1),
2-amino-5-fenylopirydyna.
CH3
N
NH2
N
H
( - )
Trp-P
2
N NH2
N
NH2
N
2-amino-5-fenylopirydyna
N
CH3
1
(Glu - - )
P
( Glu-P-1)
Wolne rodniki reagujące z DNA to rodnik hydroksylowy (OH" ), jon wodor-
kowy (H" ) oraz anion ponadtlenkowy (O2-" ). Główną, aktywną formą tlenu, odpo-
wiedzialną za powstanie większości oksydacyjnych uszkodzeń cząsteczki DNA,
jest rodnik hydroksylowy. Wynika to z jego silnie elektrofilowego charakteru,
który warunkuje dwa podstawowe typy przemian składowych cząsteczki DNA:
350
reakcję addycji z wiązaniami Ą zasad azotowych oraz dehydratację cząsteczek
deoksyrybozy.
W przypadku zasad pirymidynowych w przewa\ającej większości reakcje te
mają charakter addycji z atomami węgla, połączonymi wiązaniem podwójnym
C5 = C6 w pierścieniu, lub oderwania atomu wodoru od grupy metylowej przy
atomie węgla C5.
Natomiast w wypadku zasad purynowych reakcja ta dotyczy wiązania przy
atomie węgla C4 lub C8. Poza tym, generowanie w bezpośrednim sąsiedztwie
chromatyny wysoce reaktywnych rodników tlenowych doprowadzić mo\e do po-
wstania wiązań poprzecznych między DNA a białkami, znajdującymi się w jego
otoczeniu.
O
O
CH3
CH3
HN
HN OH
OH
OH
O N
O N
H
H
tymina
glikol tyminy
O
O
N
HN
HN N CHO
OH
H
N
NH2
H2N N
H2N N
H
Fapy-guanina
guanina
Rodniki hydroksylowe, poza oddziaływaniem z zasadami azotowymi i biał-
kami, mogą równie\ reagować z pierścieniami deoksyrybozy. Rodnik hydroksylo-
wy mo\e indukować oderwanie ka\dego atomu wodoru związanego z cząsteczką
cukru. Nie wszystkie uszkodzenia pierścienia cukrowego są wynikiem bezpośred-
niej reakcji rodnika hydroksylowego z cząsteczką cukru. Du\a ich część mo\e
powstawać tak\e na skutek oderwania atomu wodoru od cząsteczki cukru przez
powstały rodnik zasady azotowej.
Fizyczne czynniki modyfikujące DNA
Uszkodzenia DNA wywołane promieniowaniem jonizującym, czyli pro-
mieniowaniem o du\ej energii, powodują pękanie cząsteczki DNA, niszczenie
cukrów oraz zasad. Promienie jonizujące, przechodząc przez komórki, wybijają
elektrony z atomów i cząsteczek, powodując ich jonizację. Powstałe jony mogą
inicjować rozmaite reakcje wolnorodnikowe (głównie z udziałem omawianego
wcześniej rodnika hydroksylowego), uszkadzające DNA. Najgrozniejsze dla \ycia
351
komórki uszkodzenia stanowią przerwy dwuniciowe w DNA, poniewa\ mogą być
związane są z utratą fragmentu informacji genetycznej. Uszkodzenia te powstają
pierwotnie, tj. w momencie, gdy pęknięcia pojedynczych nici zlokalizowane są
naprzeciwko siebie w niewielkiej odległości, lub wtórnie, do czego dochodzi
w trakcie naprawy uszkodzonej zasady, znajdującej się naprzeciw jednoniciowego
pęknięcia DNA. Przyjmuje się, \e po zadziałaniu na komórkę promieniowaniem ł
w wysokości 1Gy (1Gy to jednostka dawki zaabsorbowanej, odpowiadająca energii
1 d\ula, przyjętej przez 1kg masy ciała) dochodzi do powstania 600 1000 pęknięć
jednoniciowych DNA, 26 40 przerw dwuniciowych łańcucha DNA i 250 uszko-
dzeń tyminy.
Promieniowanie ultrafioletowe, ze względu na małą energię i znaczną dłu-
gość fali, ma mniejszą zdolność przenikania przez tkanki ni\ promieniowanie joni-
zujące, jednak promienie UV są intensywnie pochłaniane przez DNA.
Głównym efektem działania promieni UV na DNA jest tworzenie dimerów
pirymidynowych C-C, C-T a zwłaszcza dimerów T-T pomiędzy atomami C5 i C6
jednej reszty pirymidyny, a tymi samymi atomami węgla drugiej pirymidyny.
O
O O
CH3 CH3
CH3
HN
HN NH
promieniowanie UV
2
O N
N N
O O
H
H H
tymina
dimer tymidynowy
Wynikiem tej reakcji jest powstanie pierścienia cyklobutanowego, który po-
woduje zbli\enie sąsiadujących pirymidyn, odkształcenia w szkielecie cukrowo-
fosforanowym DNA, prowadzące w rezultacie do delecji takiego dimeru.
352
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
SKRYPT WYKŁAD PROMIENIOWANIE JONIZUJĄCE A NOWOTWORZENIE ZMIANY W STRUKTURZE DNAW12 Struktura DNAStruktura chromatyny a powstawanie i naprawa uszkodzieĹ„ DNAZastosowanie mikromacierzy DNA w genomice strukturalnej i funkcjonalnej7 Czynniki strukturotwrcze i ESO [tryb zgodnoci]pojecie struktury,czynniki,funkcje,budowa,wymiary,typologia,konf20 Organizacja usług dodatkowych w zakładzie hotelarskim20 rad jak inwestowac w zlotowięcej podobnych podstron