1112
4. Zawiesić komórki w 40 pl buforu do sortowania na 107 komórek.
5. Dodać 10 jal koktajlu biotyna-przeciwciała na 107 komórek.
6. Bardzo dokładnie wymieszać i inkubować w4-8°C przez 10 min.
7. Dodać 30 pl buforu do sortowania, 20 pl kulek magnetycznych opłaszczonych przeciwciałem przeciwko biotynie.
8. Zawiesinę dokładnie wymieszać i inkubować w 4-8°C w' ciemności przez 15 min.
9. Komórki przepłukać poprzez dodanie 1-2 ml buforu do sortownia i wirować (10 min, 4°C, 350 x g).
10. Całkowicie usunąć supernatant.
11. Komórki zawiesić w buforze do sortowania (komórki w ilości do 108 można zawieszać w 500 pl buforu).
12. Kolumnę MS umieścić w polu magnetycznym separatora i przepłukać 500 pl buforu do sortowania i poczekać aż będzie pusta. Następnie na tę samą kolumnę nanieść zawiesinę komórek. Komórki, które przeszły przez kolumnę należy zebrać do nowrej probówki, są nimi komórki CD4.
13. Kolumnę MS przepłukać 3 x 500 pl buforu do sortowania, który1 należy dodawać dopiero jak kolumna będzie pusta. W eluacie będą niewielkie ilości komórek CD4.
Uw aga. Jeśli dysponujemy większą ilością komórek niż 107, to należy proporcjonalnie do
ilości komórek zwiększyć ilość buforu do sortowania, kulek magnetycznych
1 przeciwciał.
Przygotowanie buforu do sortowania:
Skład
0.5% BSA
2 mM EDTA
PBS bez jonów Ca2r i Mg2*
pH buforu doprowadzić do 7.2 i bufor zostawić w 4-8°C
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
SAM99 W irakcie trwania potencjału czynnościowego komórka m.s. ma ograniczoną zdolność do reagowani
Skanowanie 10 01 12 40 (6) Uwiązawszy łódkę do B, wyskoczyliśmy na złote płyty i przeszedłszy po je
Zadanie 104. (5pkt) Zadania maturalne CKE www.matemaks.pl Trening do matury Na zewnątrz trójkąta
HODOWLE KOMORKOWE Hodowla pierwotna - hodowla, do której założenia użyto komórek, tkanek lub narządó
Zdjęcie1306 (2) Regulatorowe komórki T używają kilku mechanizmów do supresji aktywacji i proliferacj
P1100671 Regulatorowe komórki T używają kilko mechanizmów do supresji aktywacji i proliferacji komór
danych. Wykonują operacje na komórkach, dodają wiersze i kolumny do przygotowanej tabeli. Omawia
Y- Y Y LICZBACH Więcej na www.stat.gov.pl Przynależność do wyznania Kościoła katolickiego
więcej podobnych podstron