02
zlokalizowany na chromosomie 3, locus D3S1283. Do tego celu użyć pary starterów o sekwencji: 5'-GGC AGT ACC ACC TGT AGA AAT G-3' i 5'-GAG TAA CAG AGG CAT CGT GTA TTC-3'. Reakcję prowadzić w sposób standardowy w objętości 20 pi, biorąc jako matrycę 50 ng genomowego DNA limfocytów ludzkich, stosując temperaturę asocjacji starterów 60°C i powtarzając proces 25 razy.
Odczynniki:
1) Roztwór 0,35 M NaCl - 5 mM EDTA - 1 mM DTT - 10 mM bufor HEPES (kwas N-2-hydroksy-etylo-l-pipcrazyno-2-etanosulfonowy, pH 7,5) zawierający PMSF (0,2 mM) i antypainę (10 gg/gl).
2) Roztwór 20 mM Tris/HCl (pH 7,5) - 2 mM DTT - 2 mM EDTA - 10% glicerol.
Wykonanie:
1. Wiązanie specyficznych białek ekstraktu jądrowego z unikatową sekwencją fragmentu wybranego mikrosatelitamego DNA. Proces wytworzenia kompleksu DNA-białko należy przeprowadzić w końcowej objętości 25 pl, biorąc 10 pl produktu PCR (materiał 2), 2,5 pi białkowego ekstraktu jąder komórkowych (materiał 1) i 12,5 pl odczynnika 2. Mieszaninę inkubować (w temp. pokojowej przez 30 min).
2. Rozdział elektroforetyczny. Elektroforezę w 2,5% żelu agarozowym należy przeprowadzić w standardowych warunkach (ćw. 10.36). Próbki do elektroforezy
— o końcowej objętości 15 pl — przygotować w taki sposób, aby w pierwszej znalazło się 5 pl produktu PCR (wolny fragment mokrosatelitarnego DNA), w drugiej — 12 pl roztworu po utworzeniu kompleksu DNA-białko, a w trzeciej
— wzorzec długości fragmentów DNA (rys. 10.1). Po zakończonym rozdziale żel wybarwić roztworem bromku etydyny i obejrzeć na transluminatorze UV (ultraviolet).
1 2 W
Rys. 10.1. Schemat rozdziału elektroforety-cznego: 1 — DNA oraz 2 — swoistego kompleksu DNA-białko. W — wzorzec wielkości cząsteczek polideoksyrybonukleo-tydów
392
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
Zdjęcie055 (2) 5 (1 pkt) Mężczyźni pod wzglądem alleli zlokalizowanych na chromosomie X są: a)
Zdjęcie056 (2) 3 (1 pkt) Mężczyźni pod wzglądem alleli zlokalizowanych na chromosomie X są: a)
Zdjęcie0230 2 - rybia łuska ( Ryc. 7J Choroby ludzku? związane t urnami zlokalizowanymi na chromosom
DSC93 (3) Zespół Denysa-Drasha i zespól Fras^rg? Zespoły związane z mutacją zlokalizowanego na chro
CIMG1179 gen CF zlokalizowano na chromosomie 7 (region 7q31), „duży gęg* (> 230 tys. par zasad) i
6Wiedźma Dom mój stoi na leśnej polanie. Kto do tego lasu trafi to na zawsze w nim zostanie... Czary
Scan0047 (12) Floss pokręciła głową. - Persja, mamy już tyle rzeczy na głowie. Nie
IMG820 (648 x?2) ,ulk0 w miejscach specjaln.e do tego celu wy2n (notę odbywać «f ■sl, pływać i kąp.ą
15269 repetytorium (10) Metody prezentacji zjawisk na mapa Niwelacja - określanie (mierzenie) wysoko
12Gość Konspektu W tej chwili na pewno nie, ale powinniśmy do tego celu dążyć. Przykładów
diogramów można uwidocznić na ekranie przystosowanego do tego celu oscyloskopu katodowego
Przy namiarze własnym nawigator na statku namierza stacje służące do tego celu, czyli radiolatarnie
CCF20081221 081 świata składa się z tych twierdzeń, których uznanie jest skuteczne ze względu na dą
CCF20101015 003 72 SŁAWOMIR MROZEK na by się wziąć do tego czy owego, ale po co? Na niczym to nie za
na trzy różne grupy. Po zakończeniu tego etapu obróbki wstępnej surowiec czyści się i myje. Do tego
Wypełnij krótki formularz rejestracyjny i załóż konto na ePUAP Potrzebne są do tego dane
więcej podobnych podstron