0 8
ł. wrxwvr.xni ^\fihixó\ ć»ćvu moieiN c/.tv\ Tjtowaibżic w tmlatiŁ TMfc.
ż.el wzorzec wielkości (np. DNA faga ż trawionego enzymem //int/III). Po elektroforezie sfotografować w przechodzącym świetle UV obraz otrzymanego rozdziału.
3. Denaturacja DNA w żelu. Zastosować denat urację zasadową poprzez umieszczenie żelu w 300 ml odczynnika 6 na czas nie dłuższy niż I godz.
4. Neutralizacja żelu. Po denaturacji DNA żel przemyć krótko wodą, a następnie zanurzyć w dużej ilości roztworu do neutralizacji (odcz. 7) na 1,5 godziny.
5. Suszenie żelu. Zneutralizowany żel poddać odwodnieniu w suszarce podciśnieniowej (w temp. 55*0 przez 2 godz.). Po wysuszeniu żel powinien przybrać postać cienkiej, elastycznej błony.
6. Hybrydyzacja z sondą molekularną. Wysuszony żel zanurzyć w mieszaninie hybrydyzacyjnej (objętość mieszaniny = powierzchnia żelu x 0,3 ml) (odcz. 8). Prehy-
1 2 3 4 W
Rys. 10.17. Schemat wyniku analizy rcaranżacji genów immunoglobulinowych po trawieniu genomowego DNA restryktazą fihaI i hybrydyzacji metoda Southerna z. zastosowaniem wyznakowanej radioizotopo-wo sondy molekularnej J„. Ścieżki na żelu elektroforetycznym odpowiadają: I genomowemu DNA trawionemu Hhal i wybarwionemu bromkiem etydyny; 2 — DNA z tkanki nielimfoidalnej po hybrydyzacji /. sondą J„ (widoczny prążek rcaranżacyjny dla komórek linii zarodkowej); 3 DNA z poliklonalncj populacji limfocytów B po hybrydyzacji z sondą Ju (widoczny prążek gcrminalny i „smużenie", będące efektem różnorodnych rcaranżacji w poszczególnych komórkach B); 4 — DNA ze złośliwego rozrostu B-komórkowcgo (widoczny pojedynczy prążek rcaranżacji monoklonalnejl. W — wzorzec długości fragmentów DNA (RNA)
458
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
0 8 ł. wrxwvr.xni ^fihixó ć»ćvu moieiN c/.tv Tjtowaibżic w tmlatiŁ TMfc. ż.el
skanuj0001 1,0 Dokładność (rGP)0,8 -- 0,6-- 0,4 ■ ■0,2 -> W*8✓ 0 /
08 6. Przenieść supernatant do nowej probówki i wytrącić 2 objętościami
08 DoŁółtcz r-tteuwi, ipoiot***. -40-
08 Uwagi: 1) Pozostałość niezhomogenizowanej tkanki należy poddać powtórnej
08 Rys. 10.3. Widmu fluorescencyjne: 1 oranżu akrydynowego oraz kompleksów: 2 oranż ak-rydynowy-DNA
08 a jeżeli mają różne potencjały lub jednego z wgięć brak, proces jest nieodwracalny. Położenie wg
08 Znfydlź dropę zrti&rzafoŁ do c&ia, Pomłcy,
08 3. Rozwinięcie chromatogramu. Chromatogram rozwinąć w komorze nasyconej p
08 a)0.06-0,03-0,00/ 0,25 nmoł 5-Me-dC o>& 0,00 0,5 nmol
08 Elektroforeza w żelu agarozowym. Żeli agarozowych można używać do rozdziela DNA w stosunkowo sze
08 Wykonanie: 1. Sporządzić 30% roztwór akrylamidu przez zmieszanie 29 g akrylami
więcej podobnych podstron