CCF20110521 1
Oczyszczanie produktów trawienia restrykcyjnego
Oczyszczanie należy wykonać przy użyciu elektroforezy w żelu agarozowym. Preparaty DNA będą odzyskiwane z agarozy przy użyciu agarazy (GELase, Epicentre).
1. Sporządzić żel z 1 % agarozy niskotopliwej (LMP) i jednokrotnie stężonego buforu TAE z dodatkiem bromku etydyny (do stężenia 0,5 ug/ml).
2. Przed nałożeniem na żel do próbek dodać bufor obciążający w proporcji 2 ąl buforu na 10 pi roztworu DNA.
3. Elektroforezę prowadzić w buforze TAE, przez 2 godziny, przy natężeniu pola elektrycznego 3 V/cm.
4. Po elektroforezie, w świetle UV transiluminatora, z żelu wyciąć bloczki zawierające pożądany zakres wielkości fragmentów DNA.
5. Do wyciętych bloczków dodać jednokrotnie stężony bufor reakcyjny (GELase buffer, Epicentre) w proporcji 3 ul bufom na 1 mg wyciętego bloczka. Próbki lekko kołysać przez godzinę, po czym usunąć bufor.
6. Następnie bloczki umieścić na 3 minuty w łaźni wodnej o temperaturze 70 °C, po czym przenśćje do temperatury 45 °C (termoblok) na 5 minut.
7. Następnie do próbek dodać agarazę (GELase, Epicentre) w proporcji 1 U na 600 mg masy bloczka i inkubować przez godzinę w temperaturze 45°C.
8. Preparaty uzyskane w wyniku trawienia agarazą:
a) sprawdzić poprzez elektroforezę w żelu agarozowym (5 uL),
b) użyć do ligacji z wektorem plazmidowym (objętość zależna od stężenia).
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
Rys. 16. Model wykonany przy użyciu Eosint P 350 (powyżej: w trakcie oczyszczania, poniżej: gotowy
zostaną jednoznacznie oznaczone przez Wykonawcę, a materiały źródłowe należy ostemplować przy użyciu
Wykonane przy użyciu mikroskopii sił atomowych AFM widoki topografii powierzchni próbek ze stopu Co-
Złącza te mogą byc wykonane przy użyciu spoin następujących rodzajów: czołowych (rys. 9a), pachwinow
3.0 SPRZĘT I MASZYNY Roboty można wykonać przy użyciu dowolnego typu sprzętu. 4.0
CCF20101012 000 OZNACZANIE WYBRANYCH WŁAŚCIWOŚCI FIZYCZNYCH ZWIĄZKÓW ORGANICZNYCH I. CIECZY A przy u
fizjologia stosowana8 Ryc. 8.2. Przykładowy wydruk wyników badania morfologicznego krwi wykonanego
24343 X3e50dd739p36 Rys. 29. Ściany z gotowych elementów cementowo-glinianych elementy wykonane przy
CCF20110310 049 rozdzielni (stacji) należy wykonać protokół stwierdzający, że spełnione zostały wszy
DSC04174 Nim materiał będzie poddany właściwemu oczyszczaniu, należy przeprowadzić oczyszczanie wstę
DSC08496 (4) RizofHt racja <v Do roślin wodnych pływających stosowanych w tym procesie oczyszczan
OMiUP t1 Gorski64 usuwania zanieczyszczeń z wirówki powoduje straty wirowanego oleju, podczas oczysz
50152 OMiUP t1 Gorski64 usuwania zanieczyszczeń z wirówki powoduje straty wirowanego oleju, podczas
OMiUP t1 Gorski44 W celu zrozumienia zasady działania wirówki oczyszczającej należy poznać działanie
więcej podobnych podstron