skanuj0024
43.oh.ce
Ćwiczenie III
IZOLAC JA CZYSTYCH KI L ITR
Obliczanie liczby komórek bakteryjnych " zawiesinie metodą bezpośredniego liczenia pod mikroskopem. Przygotowywanie rozcieńczeń.
1. Podstawowe pojęcia
KULTURA CZYSTA - kultura zawierająca komórki lylko jednego gatunku mikroorganizmu { pochodząca od jednej bakterii). Potomstwo jednej komórki nazywamy KOI..ONI A.
Uzyskanie czystych kultur:
A. Metod) bezpośrednie (np. posiew uproszczony, redukcyjny)
B. Metody pośrednie (metody rozcieńczeń. replik)2. Oznaczenie liczby drobnoustrojów Do oznaczania liczby drobnoustrojów w określonej objętości środowiska ciekłego lub w
jednostce wagowej materiału stałego opracowano metody bezpośrednie i pośrednie, podając odpowiednie wartości w mi lii itrze, ewentualnie w litrze. W metodach bezpośrednich dokonujemy zliczenia komórek stosując w tym celu komory (hcmocytometry) I borna. Howarda. Fuch Roseniitala. Biirkera lub szkiełka z odpow iednią podziałką.
2.1. Budowa komory do bezpośredniego liczenia bakterii
Komory do liczenia bakterii pod mikroskopem mają postać szklanych płytek z wciętym wgłębieniem podzielonym na kwadraty lub prostokąty o znanej pow ierzchni.
W komarach liczyć można większe komórki drobnoustrojów, takie jak drożdże, zarodniki, strzępki grzybów lub w y barw ionc bakterie.
Komorę Thoma przedstawia rysunek l. Jest to grube szkiełko przedmiotowe z wyciętymi wgłębieniami o głębokości 0.1 mm (I00,um)> wgłębienia te widoczne są gołym okiem po obydwu stronach środkowego kanalika jako równomierne krzy że, powstałe / przecięcia linii wyznaczających regularne, kwadratowe i prostokątne powierzchnie. Bok kwadratu wynosi I '20 mm (50pm). W każdej siatce znajduje się 400 kwadracików. Pod przykryciu komory szkiełkiem nakry wkowym nad każdym kwadracikiem powstaje prostopadłościan o objętości 1/400 mm \ 0.1 mm - i 4000 mm . Co piąty kwadrat w obu kierunkach podzielony jest na pół dodatkowa linią, w wyniku czego część kwadratów ma powierzchnię o połowę mniejszą, a cala komora podzielona jest w ten sposób na 16 dużych kwadratów. / których każdy składa się z 16 małych kwadratów. Na przecięciu dodatkowych linii powstają maleńkie kwadraciki o czterokrotnie mniejszej pow ierzchni równej 1 ż 1600 mnv .
Oznaczenie liczby drobnoustrojów przy użyciu komory Thoma wykonuje się następująco. Zawiesinę komórek mikroorganizmów, mających tendencję do zlepiania się rozcieńcza się. biorąc przykładów o: 5 objętości zawiesiny i 1 objętość kwasu siarkowego, rozcieńczonego wodą w stosunku 1:10 i wytrząsa się kilka minut, przenosi szybko do komory Thoma. przykrywa szkiełkiem przykrywkowym i przy stępuje do liczenia. Jeśli stwierdzi się zby t duże zagęszczenie drobnoustrojów, to należy próbę rozcieńczyć ilościowo np. 10-kromie i powtórzyć oznaczenie.
Oblicza się średnią liczbę drobnoustrojów z 40 kwadracików. W sumie należy policzyć około 700 komórek, by błąd nie przekroczył 10%. Komórki rozmieszczone są nierównomiernie, w jednych kwadracikach może być ich kilka w innych kilkanaście.
Przy średniej liczbie komórek w jednym kwadraciku (a) i rozcieńczeniu (n) zawartość komórek w (L) w IcnT wynosi: L = 4 x 10ft x a * n w jednym cm '.
2.2 Pośrednia metoda wyznaczania liczby bakterii (żywe +martvve)
Metody pośrednie polegają wyznaczeniu parametrów ekstynkcji lub zmętnienia, a następnie na porównaniu ich z wzorcem (odczyt z krzywej wzorcowej).
W pomiarach zmętnienia porównuje się zmętnienie próbki ze zmętnieniem w serii probówek (np. Browna lub McParlanda) zawierających rosnące stężenia zawiesiny siarczanu baru. Probówki oznacza się od I (przezroczysta) do 10 (nieprzezroczysta). Dla danego gatunku bakterii gęstość w jednej z probówek odpowiada gęstości zawiesiny komórek o znanej liczbie komórek w mililitrze. Próbka badana znajduje się w probówce o grubości i wielkości zbliżonej do tych. w której znajdują się zawiesiny wzorcowe. Dopasowuje się optycznie gęstość probówki do gęstości w konkretnej probówce i odczytuje się stężenie w tabeli towarzyszącej probówkom.
1
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
skanuj0067 (43) 82 Mathcad. ĆwiczeniaUkłady równań i nierówności Mathcad rozwiązuje układy równań i
skanuj0013 (120) 454 14. Leki przedwbakteryjne Rysunek 14.34. Barierą przepuszczalności dla komórek
skanuj0029 (155) 42 Mathcad. Ćwiczenia 5. Jak widać na rysunku 3.43, Mathcad poprawnie zidentyfikowa
37584 skanuj0039 (43) Ji
67758 skanuj0011 (43) 106 płaszczyzny polaryzacji światła we wszystkich trzech stanach skupienia i z
skanuj0012 (106) Możesz wykonać ćwiczenia rozdąoawce (mętnie w cmm* pr/n znaczonym na odpoczynek.
więcej podobnych podstron