prep biomol skrypt0
Ćwiczenie 3.
( hmmatografia powinowactwa białek plazmy nasienia knura wiążących jony Z,n:+ na Chelating Sepharose Fast Flow oraz Ig(i na złożu Protein A Scpliarose
Chromatografia powinowactwa
Chromatografia powinowactwa jest szczególnym typem chromatografii adsorpcyjnej, w której wykorzystuje się wzajemne powinowactwo dwóch substancji. Ze względu na swe unikalne właściwości pozwala znacznie uprościć procedurę izolowania wybranej substancji, przy jednoczesnym zachowaniu jej biologicznej aktywności
Interakcja substancji rozpuszczonej w fazie ruchomej z unieruchomionym ligandem może mieć różny charakter, może to być oddziaływanie pomiędzy: hormonem a receptorem,
- enzymem a substratem, przeciwciałem a antygenem łub haptenem, komplementarnymi odcinkami kwasów nukleinowych, kwasami nukleinowymi a białkami,
- lektynami a glikoproteinami,
- dopełniaczem a przeciwciałami z grupy IgG itp.
Chromatografię powinowactwa przeprowadza się zwykle w dwóch etapach. W pierwszym etapie przez kolumnę przepuszcza się materiał zawierający cząsteczki komplementarne do ligandu. Przemieszczające się w obrębie złoża cząsteczki odnajdują unieruchomiony Jigand i wiążą się z nim. Po wymyciu nieswotśde zaadsorbowanych cząsteczek rozpoczyna się drugi etap, w którym dochodzi do dysocjacji powstałych kompleksów i elucji swoiście związanych makromolekuł.
Dysocjacji kompleksów można dokonać w różny sposób. Można zastosować specyficzny eluent zawierający kompetytor współzawodniczący o miejsca wiążące z ligandem. Można jednak eluować związane substancje w sposób niespecyficzny, za pomocą buforów o niskiej lub wysokiej wartości pH (np. bufor octanowy, bufor węglanowy itp.), roztworów o wysokiej sile jonowej (2,5 M roztwór NaCl) czy związków rozrywających wiązania wodorowe (4-8 M roztwór mocznika, 6 M roztwór guanidyny). Po zakończeniu elucji należy usunąć zastosowane w tym celu substancje od wyizolowanych makromolekuł. Można to zrobić różnymi metodami, np. stosując dializę, ultrafiltrację lub filtracje żelową.
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
prep biomol skrypt 7 Ćwiczenie 2. Wstępne oczyszczanie białek różnymi technikami chromatograficznymi
prep biomol skrypt 2 Ćwiczenie 1. Metody chromatograficzne. Przygotowanie kolumny, złoża i buforów d
prep biomol skrypt 6 Wyznaczanie mas cząsteczkowych białek 1. Wykonać pomiar spekt
prep biomol skrypt3 Ćwiczenie 4 < li rafia fiydrufuhowa (HIC) i ml wróconej f
prep biomol skrypt5 Ćwiczenie 5. Rnzd/inl ’k ji!a/m misicnin nu Tu(b
prep biomol skrypt 0 PRAKTYCZNA BIOCHEMIA BIAŁEK
prep biomol skrypt1 Izolowanie białek wiążących jony metali Większość cząsteczek białkowych w różny
prep biomol skrypt8 Rozdział ełektroforetyczny plazmy nasienia na aktywność dysniutazy ponadtlenkow
prep biomol skrypt 1 SEPARACJA y-CLOBULIN Z SUROWICY KRWI Gamma - globuliny otrzymuje się na ogół pr
prep biomol skrypt 3 rozmiary ziarna żelu tym mniejsze są opory przepływu aJe tym gorsza jest też uz
prep biomol skrypt 4 Do określenia objętości rozpuszczalnika (eluentu) wypełniającego przestrzenie m
prep biomol skrypt 5 Wykonanie 1. Kolumnę zamocować pionowo w statywie. 2. &
prep biomol skrypt 8 Wykonanie: 1) Przemyć kolumnę 5 mi buforu A. Nie dopuścić do
prep biomol skrypt 9 Przed rozpoczęciem izolacji kolumnę należy ekwilibrować poprzez przepuszczenie
prep biomol skrypt2 3 Po zrównoważeniu złoże wysycić jonami Zn24. 4. Po naniesien
prep biomol skrypt4 b) Rozdział surowicy ki-wi na złożu Phenyl Sepharosc HP z wyk
prep biomol skrypt6 Obecnie najbardziej rozpowszechnionym systemem SDS-PAGE jest układ wg Laemmli (
prep biomol skrypt7 Akrosyna (EC 3.4.21.10) to najbardziej aktywny enzym akrosomu plemnika. Wystypu
prep biomol skrypt9 Procedura barwienia: > Żele przenieść do oznakowanych prob
więcej podobnych podstron