45302 IMG97
7AS. JAKOŚCIOWA ANALIZA CUKRÓW METODAMI CHROMATOGRAFICZNYMI
Metody chromatografii bibułowej Układy rozwijające:
1) octan etylowy —kwas octowy —woda (3:1:3)
(glukoza, galaktoza, mannoza, arabinoza, ksyloza);
2) octan etylowy—kwas octowy —woda (9:2:2)
(kwasy cukrowe);
3) octan etylowy — pirydyna — woda (2:1:2)
(glukoza, galaktoza, mannoza, arabinoza, ksyloza);
4) n-butanol—kwas masłowy — woda (1:1:1)
(cukrowce redukujące i nieredukujące);
5) n-butanol —pirydyna —woda (45:25:40)
(pentozy, heksozy, dwucukry redukujące, glukozami na);
6) chromatografia dwukierunkowa
a) fenol—woda (1:1),
b) butanol—kwas octowy —woda (4:1:5).
Układy wywołujące:
1) Amoniakalny roztwór azotanu srebra (1 część 2°/0 roztworu azotanu srebra +1 część 8% amoniaku). Chromatogram spryskać wywoływaczem, a następnie wysuszyć w suszarce o temperaturze 105° C w ciągu 5-10 min. Cukry redukujące wystąpią w postaci brunatnych plam;
2) Etanolowy roztwór naftolu (1% etanolowy roztwór a-naftolu z dodatkiem 10°/o kwasu o-fosforowego). Po spryskaniu i wysuszeniu w temperaturze pokojowej ketozy ujawnią się w postaci barwnych plam;
3) Butanolowy roztwór aniliny (1 część 17% butanolowego roztworu aniliny +2 część 6% butanolowego roztworu kwasu o-fosforowego). Po spryskaniu chromatogram suszyć w suszarce o temperaturze 110°C przez 10 min. Akiozy pojawią się w postaci brunatnych plam.
Przygotowanie roztworu do chromatografii. Ekstrakcję cukrowców z badanego produktu przeprowadzić octanem etylu. Cukry nie są rozpuszczalne w octanie etylu i dlatego też zbiera się warstwę wodną. W zależności od przewidywanego stężenia cukrów we frakcji wodnej należy zastosować rozcieńczanie prób lub zagęszczanie (temperatura do 55° C, pod zmniejszonym ciśnieniem). Przygotowaną w ten sposób próbkę ekstrahować bezwodnym etanolem w takiej ilości, aby stężenie końcowe etanolu wynosiło ok. 75%. Ekstrakt etanolowy należy odwirować.
Nanoszenie próbek i rozwijanie chromatogramu. Na dwa paski bibuły Whatman nr 1 lub nr 4 nanieść na punkty startowe 0,002 - 0,005 cm3 chromatografowanej próbki i roztworów wzorcowych cukrów (1%). Po wysuszeniu plam naniesionych próbek rozwijać chromatogram techniką spły-
wową, stosując jeden z podanych układów rozwijających. Jeżeli mieszanina zawiera więcej cukrowców, stosować chromatografię dwukierunkową.
Wywoływanie chromatogramów i identyfikacja cukrowców. Po rozwinięciu i wysuszeniu chromatogramów, spryskać je jednym z podanych rozpuszczalników. Cukrowce na chromatogramie identyfikować na podstawie barwy plam i wartości Rf plam uzyskanej dla substancji badanej w porównaniu z substancjami wzorcowymi.
Metody chromatografii cienkowarstwowej
1. Żel krzemionkowy G według Stahla typ 60.
2. Roztwory wzorcowe cukrów (1%).
Układy rozwijające:
1) w-butanol-aceton-woda (7:2:1)
(glukoza, fruktoza, sacharoza, maltoza, laktoza);
2) chromatografia dwukierunkowa
a) n-propanol-octan etylu-woda (7:1:2),
b) aceton-85°/o kwas mrówkowy-etanol (3:1:1),
3) izopropanol-octan etylu-woda (1:2:3).
Układy wywołujące:
1) Odczynnik dwufenyloanilinowy. Zmieszać 10 cm3 2°/o roztworu dwu-fenyloaminy w 95% etanolu i 10 cm3 2% aniliny w 95% etanolu oraz 2 cm3 85% kwasu ©-fosforowego;
2) Odczynnik wanilinowy. Rozpuścić 250 mg waniliny w 10 cm3 etanolu oraz dodać 0,5 cm3 stężonego kwasu siarkowego.
Tabela 1S. Wartości Rg i zabarwienie niektórych cukrowców
|
Cukier |
Wartość Rg |
Zabarwienie pla 5-dwufenyloaminą |
m po spryskaniu waniliną |
|
Ramnoza |
1,32 |
zielone |
czerwonobrązowe |
|
Ksyloza |
1,25 |
fioletowe |
brązowe |
|
Arabinoza |
1,08 |
fioletowe |
brązowe |
|
Sorboza |
1,06 |
brązowe |
niebieskozielone |
|
Glukoza |
1,00 |
niebieskoszare |
ciemnobrązowe |
|
Mannoza |
1,00 |
niebieskoszare |
ciemnobrązowe |
|
Fruktoza |
<*90 |
brązowoczerwone |
niebieskoszare |
|
Galaktoza |
0,80 |
niebieskoszare |
ciemnobrązowe |
|
Sacharoza |
<*75 |
szare |
niebieskoszare |
|
Celobioza |
0,69 |
niebieskoszare |
szare |
|
Furanoża |
0.69 |
ciemnobrązowe |
niebieskoszare |
|
Trehaioza |
0,63 |
niebieskoszare |
szare |
|
Laktoza |
0,42 |
niebieskoszare |
ciemnobrązowe |
|
Rańnoża |
0l39 |
szare |
niebieskoszare |
181
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
img089 2 4.4.4. Przykłady jakościowej oraz iloścłowo
IMG16 Diagnostyka zakażeń c.d. WYKRYWANIE ZARAZKA: Metoda hodowlana Metody immunofluorescencyjne
•o powicrzchn1"1 1 Sprawozdanie 2 Analiza ilościowa metoda chromatografu gazowej
260 Bibliografia Hermanowicz W., Sikoraska C. Oznaczenie ołowiu w wodzie metodą chromatografii bibuł
biochemia labolatorium Ćwiczenie 1. Na czym polega metoda chromatografii bibułowej. C o to są aminok
IMG?97 (2) 1 1 (l0lHenne frf* wv***fl ******* Społecznej Psychologia Jakości Życia 2003, tom 2 nr 1
16556 IMG12 (17) a jakością mięsa (wg Borzuta K., Pośpiech E.: Analiza korzyści związanych ze wzros
IMG97 Badania przemian metodą „in situ” można również prowadzić nie na implantowanych próbkach umie
Metody analizy sensorycznej w ocenie jakości produktów spożywczych c.d. ■ metoda ilościowej analizy
Slajd18 (86) Analiza prędkości - metoda graficzna (DjAB~rT AB—R^ +7^> r2 1 MĄ
IMG80 (2) Argentometria Dział analizy strąceniowej obejmujący oznaczenia z wykorzystaniem mianowane
więcej podobnych podstron