geny
2

tów lub całych genów (geny odniesienia jako kontrola). W technice tej stosuje się wiele par sond. Sondy zawierają, oprócz sekwencji docelowych komplementarnych do sekwencji ekso-nowych (sekwencje ulegające hybrydyzacji), sekwencje starterowe, a jedna z każdej pary dodatkowo unikatową sekwencję wstawki (ryc. 5).

S&kwencjs prtmerowa x

Ryc. 5. Budowa sond w MLPA.

Sekwencje hybrydyzujące każdej pary sond wiążą się komplementarnie do sąsiadujących ze sobą fragmentów DNA i tylko przy w pełni komplementarnej hybrydyzacji może zajść ligacja (ryc. 6).

Po przyłączeniu sond do matrycy następuje ich ligacja, a następnie denaturacja, Oddy-socjowana zligowana sonda zawierająca sekwencje startowe zostaje poddana amplifikacji w reakcji PCR. Obecność różnej długości wstawek pozwala na rozróżnienie produktów skierowanych na różne cele, a ilość produktu jest proporcjonalna do ilości sekwencji matrycowej, Każdy pik odpowiada produktowi amplifikacji zligowanej specyficznej pary sond (ryc, 7),

Różnice względne w wysokości bądź powierzchni piku wskazują na zmiany ilościowe (bądź czasami jakościowe) docelowej sekwencji sondy (ryc, 8).

Ryc. 8. Wynik elektroforezy próby badanej wskazujący na delecję eksonu 13.

Zaletą tej techniki jest niewielka ilość DNA wymagana do przeprowadzenia analizy i możliwość zastosowania nawet zdegradowanego materiału genetycznego. Najważniejszymi zaletami metody są prostota wykonania, niska cena i małe wymagania co do ilości (20 ng ge-nomowego DNA) i jakości DNA. Oferowane gotowe zestawy sond dotyczą najważniejszych znanych genów silnie predysponujących do nowotworów takich jak: ATM, BRCA1, BRCA2, CHEK1, MLH1, MSH2, MSH6, PMS2, APC, FANCA, FANCD2, PTCH, BMPR1A, SMAD4, TP53, CDH1, MEN1, NF1, NF2, STK11, SMARCB1, RB 1, CDKN2A CDKN2B, WTł.

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
70662 skanuj0026 (119) 42 genów cennego przodka założyciele linii. V metodzie tej wraca się często d
64018 skanuj0025 (124) 42 - genów cennego przodka założyoiela linii. W metodzie tej maca się często
Techniki le stosuje się bez przemieszczania gleby („
str  Pismo techniczne Do opisywania rysunków technicznych maszynowych stosuje się pism<» rodzaju
str  Pismo techniczne Do opisywania rysunków technicznych maszynowych stosuje się pismo rodzaju A l
PrepOrg cz I2 - 32 - stałą a gazem mieszanie mechaniczne zastępuje przepływ gazu. Najczęściej miesz
strona (124) odbywać się przy zautomatyzowanej kontroli temperatury ciała. Stosuje się trzy lub pięć
10027 A Wyeliminowanie lub zamiana genów markerowych (uprzednio były to geny odporności
img040 (3) Metody analizy mutacji•    Duże delecje lub rearanżacje genów -
50247 Odpowiedzi i wskazówki Zad I 62 , , 2    5 b) 3 < * < 4> d) a: > 4
Finanse p stwa Wypych88 289 Ocena finansowa przedsięwzięć rozwojowych lub używając oznaczeń stosowan

więcej podobnych podstron