30420 skanuj0012
K.3[Fe(CN)6] może być używany jako sztuczny akceptor elektronów pochodzących z PS II (Ryc. 4). W wyniku naświetlania wyizolowanych chloroplastów żelazicyjanek ulega redukcji do żelazo-cyjanku zgodnie z reakcją:
PS II + światło
4K.3[Fe(CN)6] + 4K+ + 2H20 -► 4 K4[Fe(CM)fl] i 4 FT i- 02
Redukcji żelazicyjanku towarzyszy spadek absorbancji mierzonej przy 420 nm. Mierząc zmiany absorbancji można obliczyć ilość nmoli powstałego żelazocyjanku w określonej jednostce czasu, w przeliczeniu na mg chlorofilu lub mg białka chloroplastowego.
Wykonanie:
Do 3 probówek wirówkowych napipetować po 1.5 ml zawiesiny chloroplastów (każda para pracuje oddzielnie!). W zaciemnionym pomieszczeniu, w warunkach przyciemnionego zielonego światła, dodać do każdej próby po 0.5 ml 6 mM roztworu K3|Fe(CN)6). (UWAGA! Proszę zwrócić uwagę na dokładność pipetowania!). Próbę kontrolną umieścić w całkowitej ciemności (6 otwór w statywie), natomiast pozostałe 2 próby naświetlać rzutnikiem przez 2 i 4 minuty. W odpowiednim czasie reakcję hamować dodając do naświetlanych prób po 2 ml 10% roztworu TCA. Próby natychmiast dobrze wytrząsnąć i odstawić do statywu. Po zahamowaniu reakcji w 2 próbie (4 min naświetlania) dodać również 2 ml 10% TCA do próby kontrolnej (nienaświetlanej). Wytrącone białka odwirować przy 3000 obr/min. przez 10 minut. W celu dokonania pomiarów, do suchych probówek ściągnąć ostrożnie z nad osadu po około 2 ml klarownego (!) nadsączu i zmierzyć ab-sorbancję każdej próby względem wody destylowanej. (A, = 420nm). Wykreślić na papierze milimetrowym zmiany absorbancji w zależności od czasu naświetlania, a następnie zależność AA (absor-bancja próby kontrolnej minus absorbancja próby badanej) od czasu naświetlania kolejnych prób.
W obliczeniach stężenia powstającego w wyniku reakcji K4[Fe(CN)6] przyjąć,wartość molowego współczynnika absorpcji dla K3[Fe(CN)6] równą 1040. Obliczyć ilość K4|Fe(CN)6], wyrażoną w nmolach, powstającego w ciągu 60 min w warunkach wykonanego doświadczenia. W obliczeniach proszę uwzględnić objętość końcową prób wynoszącą 4 ml (2 ml mieszaniny reakcyjnej + 2 ml 10% TCA).
11
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
Uzyskana z przeróbki makulatury celuloza może być używana jako warstwa izolacyjna w ścianach. Produk
Rys. 3. Schemat blokowy architektury AVR Sześć spośród 32 rejestrów roboczych może być używane jako
67304 P1100461 (2) Mirr* Igorzki smak
Img00011 (2) 15 Jednocześnie krążący po orbicie elektron może być traktowany jako elementarny prąd e
skanuj0028 (133) Jaką pomoc w systemie edukacji może otrzymać dziecko z FAS? Większość dzieci z FAS
34757 skanuj0307 (2) we są samohamowne. W zależności od przeznaczenia przekładni cecha ta może być t
skanuj0012 MISECZKA 1. Papryka może być fanta- 2. W tym celu należy odciąć zyjną miseczką na sałatkę
hpqscan0002 Wskaźnik pewności może być traktowany jako pewnego rodzaju wskaźnika ryzyka. Niska jego
więcej podobnych podstron