64778 skanuj0009

/la da nie aktywności dehydrogenaz osadu czynnego

(Przygotowanie próbki do badań. Odwirować 50-ml (do dwóch probówek wirówkowych po 25 ml) próbkę f ścieków z osadem czynnym przy 1000-2000 obr/tnin przez 5 min. i zdekantować ciecz nadosadową Do każdej probówki wirówkowej dodać 25 ml wody buforowej i odwirować. Czynność tę powtórzyć. Po odwirowaniu próbki zdekantować ciecz nadosadową, a do osadu dodać 25 ml wody buforowej i wymieszać. Następnie zawartość probówek wirówkowych przelać do kolbki i użyć do oznaczenia aktywności dehydrogenaz. Przygotowanie roztworu siarczynu sodowego 0.36%. W kolbie miarowej o pojemności 50 ml rozpuścić 0,13 g siarczynu sodowego wodą bidestylowaną i wymieszać. Roztwór przygotowywać każdorazowo bezpośrednio przed oznaczaniem.

Oznaczanie aktywności dehydrogenaz.

•    do siedmiu probówek z doszlifowanymi korkami wlać po 5 ml buforu Tris-HCI oraz po 5 ml przygotowanej próbki osadu czynnego.

•    do sześciu probówek dodać po 2 ml TTC, a do siódmej probówki 2 ml wody buforowej (kontrola).

•    do dwóch probówek dodać po 2 ml roztworu glukozy (substrat I), do kolejnych dwóch 2 ml roztworu fenolu (substrat II), a kolejnych dwóch po 2 ml wody buforowej (oddychanie endogenne). PROBÓWKI PODPISAĆ !!!

•    do wszystkich siedmiu probówek dodać 1 ml roztworu siarczynu sodowego i próbki lekko wymieszać.

•    inkubować w temperaturze 37°C przez 30 minut. Reakcję przerwać przez dodanie do każdej probówki po jednej kropli kwasu siarkowego.

•    do wszystkich siedmiu probówek dodać po 10 ml alkoholu n-butylowego, dokładnie wymieszać i wstawić do łaźni wodnej o temperaturze 90°C na 5 minut.

•    pobrać po 5 ml ekstraktu butanolowego i wirować w wirówce przy 6000 obr/min przez 5 minut. Po odwirowaniu zdekantować kolejno ciecz nadosadową do czystych probówek.

•    oznaczyć absorbancję z 6 pierwszych probówek przy długości fali 490 nm, stosując jako kontrolę próbkę z siódmej probówki (bez dodatku TTĆ). W przypadku zmętnienia próbki po zdekantowaniu próbkę lekko ogrzać w łaźni wodnej do uzyskania klarownej cieczy.

Obliczanie wyników oznaczania. Aktywność dehydrogenaz dla próbek z glukozą, fenolem i bez substratu (X) obliczyć w pmolach na 1 mg białka wg wzoru:

ax 200

X =-------------

5 x Bb

gdzie:

a = średnia zawartość TF w dwóch równoległych próbkach osadu o objętości po 5 ml, odpowiednio z glukozą,

fenolem lub bez dodatku substratu, pmole

Bb = zawartość białka bakteryjnego, w mg/ml

200 = współczynnik przeliczeniowy z objętości 5 ml na łOOOml,

5    = współczynnik przeliczeniowy z objętości 10 ml na 50 ml alkoholu n - butylowego

za aktywność jednostkową należy przyjąć powstanie w warunkach testu 1 umole TF/mg białka)

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
skanuj0006 Temat: Oznaczanie aktywności enzymatycznej osadu czynnego (aktywności dehydrogenazy, kata
skanuj0038 boranta, któremu nie wypada wypowiedzieć sądu wartościującego, muszą prowadzić do głęboki
45192 IMG$29 (3) 310 ŁA-iaMiwuiw<włow ładunku powierzchni osadu wskaźnik absorpcyjny, odpowiednio
skanuj0002 Niektórzy autorzy działalność biura podróży przy tworzeniu imprezy ograniczają do dwóch
skanuj0002 Niektórzy autorzy działalność biura podróży przy tworzeniu imprezy ograniczają do dwóch
skan1 raluości nie jest uszczęśliwianie ludzi, lecz przygotowanie ich do życia wiecznego”. To pewne
28863 skanuj0076 160 Programy resocjalizacyjne STOP I „Respect”1.1. Ocena kandydatów i przygotowanie
skanuj0101 (2) 132 Słowotwórstwo wisku słowotwórczym, była już mowa przygodnie w odniesieniu do pows
skanuj0002 Drogie CzytelniczkiI Nie da się ukryć: po /wlskiejelotejjesieni nadeszła zima. a wraz z n
skanuj0004 2.    sprawdzenie enzymatycznej aktywności osadu czynnego 3.   &

więcej podobnych podstron