25163

- sens transformacji tylko wtedy, gdy gen ulega ekspresji

• należy przygotować odpowiednie promotory

• część niekodująca

• zbiera sygnały z zewnątrz (bodźce, hormony)

- klonowanie genów organizmów wyższych, u drożdży lub Pmcaryota

• promotor musi być zawsze! z komórki gospodarza

• różne promotory w zależności od genu, o wysokiej ekspresji

np. galaktozydazy GALI - typowe dla drożdży fosfatazy PHO enolazony EN01

• należy dopilnować żeby była niezmieniona ramka odczytu

- ważna potranslacyjna obróbka w komórce gospodarza, bo t zapewnia odpowiednią konformację i aktywność

metody odczytywania genów:

PCR dobre tylko dla małych fragmentów (polimeraza się myli; do kilku tyś. nukeotydów)

- problem z genami mozaikowymi

- introny trzeba zlikwidować - dlatego izolację prowadzi się na matrycach mRNA IZOLACJA NA MATRYCACH mRNA

- wyspecjalizowane komórki organizmów zwierzęcych produkują specjalne białko (np. w jajowodach ptaków)

- mRNA to czynnik ekspresji genów jakiegoś białka, w pewnych komórkach dużo 1 typu mRNA ~ Temis i Baltimore - Nobel za odkrycie odwrotnej transkiyptazy

- mRNA -> DNA (zgodnie z dogmatem biologii molekularnej)

pseudogen (bez intronów) wprowadzany do wektora, potem zrekombinowany z DNA biorcy

metoda „SHOT GUN” - strzał na ślepo

- przypadkowa fragmentaryzacja DNA jądrowego na małe fragmenty, określonym enzymem (np. BamHl) wprowadza się do wektora, tu też działa enzym; tworzą się lepkie końce ( bo tniemy tym samym enzymem) i powstają rekombinanty

- cały genom w różnych częściach wektora (bank genów, biblioteka genowa); liczne kopie

~ przechowywane w postaci klonów bakteryjnych

~ duża liczba transformantów z wektorem i określonym fragmentem DNA - miliony komórek w banku genów, różne metody przechowywania i przekazywania; lub też w postaci DNA w temp. -70°C

metoda PRZECIWCIAŁ

- ekspresja genu, otrzymanie produktu (białko

- przeciwciała - stwierdzenie, które komórk produkują dane białko

• identyfikacja produktów genu

metoda HYBRYDYZACJI

- mały fragment DNA znakowany sondą molekularną, identyfikowany, znakowany P32 (małym fragmentem łapiemy duży fragment)

- spacer po chromosomach - izolacja kolejnych fragmentów DNA zawierających dany gen

metoda komplementacji w komórkach gospodarza (defektywnej funkcji)

- defektywny mutant drożdży, np. uszkodzenie oddychania

- transformujemy mutanta strukturami fenotypu dzikiego

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
3 Zwierzęta w stanie wolnym 1. ciecze i gazy Sens wyróżnienia cieczy oraz gazów pojawia się tylko wt
skanuj0093 (19) 96 JOANNA PRZYBYŚ na zachowanie walorów kultury, folklor istnieje tylko wtedy, gdy j
img051 (30) 56 /(**)= O, (3.65) a więc wtedy i tylko wtedy, gdy jc* jest pierwiast
skanuj0008 (351) ■ występuje tylko wtedy, gdy proporcje ludności wiejskiej i miejskiej zmieniają si
skanuj0026 (19) Okrąg opisany na czworokącie Na czworokącie można opisać okrąg wtedy i tylko wtedy,
skanuj0093 (19) 96 JOANNA PRZYBYŚ na zachowanie walorów kultury, folklor istnieje tylko wtedy, gdy j
spektroskopia013 26 Dla przypadku trójwymiarowego maksimum e2 można otrzymać stosując osobliwości Mx
Druga postać normalna (2NF) Relacja jest w drugiej postaci normalnej wtedy i tylko wtedy gdy jest w
s356 156 Poznaj Limu (po if) powoduje wykonanie poleceń wypisanych po -hen wtedy i tylko wtedy, gdy
IMGw39 pracowników jest możliwa tylko wtedy, gdy oni sami wiedzą, czego chcą-i kąd zmierzają. Chcąc

więcej podobnych podstron