3014256227
IZOLACJA CYSTATYNYZ BIAŁKA JAJA Z ZASTOSOWANIEM FILTRACJI MEMBRANOWEJ.. 89
Da: formy A nieufosforylowanej o pi = 6,5 oraz formy B ufosforylowanej o pl=5,6 [2,
9] . Cystatyna białka jaja kurzego jest silnym inhibitorem papainy i ficyny oraz katep-syn B, H, L i peptydaz papaino-podobnych [1], Białko to charakteryzujące się wysoką stabilnością zarówno w ekstremalnych warunkach pH (pH około 12,0), jak i temperatury (-20°C i 115°C przez 15 min nie powoduje spadku aktywności inhibicyjnej) [5,
10] . Według klasyfikacji Rawlingsa i Barretta [6] należy ona wraz z ludzką cystatyną c do drugiej podrodziny cystatyn; oba inhibitory wykazują wysoki stopień podobieństwa, wyrażający się zbliżoną masą molekularną, strukturą trzeciorzędową, sekwencją aminokwasową oraz sposobem inhibicji enzymów. Dlatego też cystatyna izolowana z białka jaja kurzego może być stosowana w leczeniu wielu chorób, m.in.: chorób nowotworowych, choroby Alzheimera, czy schorzeń przyzębia [4, 7]. Istotnym ograniczeniem w pozyskiwaniu inhibitora z białka jaja jest jego niska zawartość wynosząca 0,05% oraz duża lepkość białka jaja utrudniająca proces chromatografii powinowactwa z wykorzystaniem papainy, który jest podstawową metodą wykorzystywaną do oczyszczania cystatyny. W związku z tym procesy izolowania i oczyszczania cystatyny są łatwiejsze do przeprowadzenia, jeśli stosuje się rozcieńczone roztwory białka, bądź frakcje białek jaja uzyskiwane m.in. w procesach izolacji lizozymu prowadzonych z wykorzystaniem technik chromatograficznych i separacji membranowej. Proces pozyskiwania cystatyny jest wówczas dwustopniowy; w pierwszym etapie wydziela się filtrat białkowy wzbogacony w inhibitor (przy wykorzystaniu technik membranowych), w drugim prowadzi się oczyszczanie inhibitora techniką chromatografii powinowactwa, dlatego też celem przeprowadzonych badań było opracowanie podstaw procesów izolacji i oczyszczania cystatyny białka jaja przy użyciu wspomnianych technik separacji.
Materiał i metody badań
Całość doświadczenia, podobnie jak proces izolacji cystatyny z białka jaja i jej oczyszczania, podzielono na dwa etapy. W etapie pierwszym pozyskiwano filtraty białek jaja wzbogacone w cystatynę metodami separacji membranowej. Materiałem do badań było białko jaja, oddzielone od żółtka metodą przemysłową (Ovopol, Nowa Sól), o pH w granicach 8,5-9,0, które poddawano procesowi mikrofiltracji (diafiltracji) na filtrach kapilarnych polipropylenowych o rzeczywistym punkcie "odcięcia" wyznaczonym w stosunku do białek jaja na poziomie 30 kDa (w warunkach filtracji niskociśnieniowej rzędu ok. 1-2-103 kPa) przy rozcieńczeniu wodą w stosunku od 1:2 do 1:6. Przeprowadzono również diafiltrację roztworów białka jaja (rozcieńczonych w stosunku 1:4) po izolacji z nich lizozymu metodą chromatografii jonowymiennej w warunkach przemysłowych (Ovopol, Nowa Sól). Filtraty uzyskane w wyniku separacji na filtrach kapilarnych polipropylenowych zagęszczano na filtrach membranowych poli-sulfonowych o nominalnym punkcie "odcięcia" 10 kDa, a następnie suszono rozpyło-
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
91 IZOLACJA CYSTATYNY Z BIAŁKA JAJA Z ZASTOSOWANIEM FILTRACJI MEMBRANOWEJ.. padła diafiltracja roztw
93 IZOLACJA CYSTATYNY Z BIAŁKA JAJA Z ZASTOSOWANIEM FILTRACJI MEMBRANOWEJ...do 3,20% aktywnej cystat
95 IZOLACJA CYSTATYNYZ BIAŁKA JAJA Z ZASTOSOWANIEM FILTRACJI MEMBRANOWEJ..CYSTATIN ISOLATION FROM EG
ŻYWNOŚĆ 3(24) Supl., 2000 MAŁGORZATA KORZENIOWSKA, WIESŁAW KOPEĆIZOLACJA CYSTATYNY Z BIAŁKA JAJA Z
SA400082 (3) Białka jaja zawierają duże ilości aminokwasów egzogennych, szczególnie metioniny, lizyn
Laboratorium problemowe. Model Helikoptera, Sprawozdanie.W celu wygładzenia różnicy zastosowano filt
IMG 75 (3) f ITlOitolW 58. Do wykrywania białka nie zastosować metody: a)
DSC00140 (13) Zastosowanie filtracji w przemyśle spożywczym i chemicznym A - prasy filtr, ramowe, B
43091 PA270160 zależą od specyfiki zastosowania. W filtracji okresowej dana objętość rozcieńczonej z
PRODUKCJA, CHARAKTERYSTYKA 1 ZASTOSOWANIE PRZECIWCIAŁ MONOKLONALNYCH... 89 surowicy krwi oraz uzyska
Zdjęcie0133 Śluzowacenie wina Wino staje si<ę oleiste, śluzowate/konsystencja białka jaja kurzego
DSC00261 (2) Skład aminokwasowy białka jaja kurzego (owoalbumina) i białka mleka kobiecego
ROLA BIAŁEK W ŻYWIENIU I TECHNOLOGII ŻYWMOŚCI Właściwości pianotwórcze - (np. białka jaja kurzego)
I Laboratorium 4 ZASTOSOWANIE FILTRACJI ŻELOWEJ DO ODSALANIA I FRAKCJONOWANIA BIAŁEK 1
PółproduktyGryka Gryka zawiera białko o bardzo wysokiej wartości odżywczej, zbliżonej do białka jaja
więcej podobnych podstron