7368841152

Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015

Materiały i odczynniki

1.    12- godzinna hodowla drożdży S. cerevisiae w pożywce YPD (50 ml)

2.    Bufor do sferoplastyzacji:

1 M sorbitol,

50 mM Tris-HCl, pH 7,5 20 mM EDTA,

20 mM P-MET (dodać bezpośrednio przed użyciem)

3.    Zymoliaza 100T (handlowy preparat zawierający litykazę) - 2,5 mg/ml w buforze do sferoplastyzacji

4.    10 % w/v SDS

5.    Bufor do lizy (50 mM Tris pH 7.5; 20 mM EDTA)

6.    5 M octan potasu

7.    96% i 70% etanol (oziębiony)

8.    Bufor TE (10 mM Tris - HC1, pH 7,5; 1 mM EDTA)

9.    Termoblok lub łaźnia wodna

10.    Jałowe probówki Eppendorfa o poj. 2 ml i końcówki do pipet

11.    Mikroskop świetlny oraz szkiełka podstawowe i nakrywkowe

12.    Odczynniki i zestaw do elektroforezy kwasów nukleinowych (patrz załącznik do ćwiczeń)

Przed przystąpieniem do wykonania ćwiczenia przygotować łaźnie wodna o temp. 37°C oraz blok grzejny o temp. 65°C oraz schłodzić wirówkę do temp. 4°C

Wykonanie ćwiczenia

1.    Przenieść 4 ml zawiesiny komórek do dwóch probówek Eppendorfa o poj. 2 ml. Osadzić komórki przez wirowanie przy prędkości 5000 rpm przez 3 min. w temp. 4°C.

2.    Uzyskane osady komórek zawiesić łącznie w 0,5 ml buforu do sferoplastyzacji w jednej probówce Eppendorfa (dodać P-MET do końcowego stężenia 20 mM!).

3.    Dodać 20 pl roztworu zymoliazy 100T, dobrze wymieszać i inkubować przez 20 min w temp. 37°C .

4

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 Materiały i odczynniki 1.    Całonocne
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, wrzesień 2014 Materiały i odczynniki 1.    12-
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 9. Odczynniki i zestaw do elektroforezy kwasów nukleino
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 UNIWERSYTET MARII CURIE-SKŁODOWSKIEJ WYDZIAŁ BIOLOGII I
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 starterów czy nieodpowiedniego stężenia jonów Mg+,
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 powtarzalności między rozdziałami tej samej próbki
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 6 % CHAPS 80 mM Tris base 100 mM DTT - dodać bezpośredn
Zakład Biologii Molekularnej UMCS. luty 2015 6.    Zawiesinę mieszać poprzez vortekso
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 Fot.GE Healtcare 14. Usunąć folię zabezpieczającą pasek
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 a następnie od drugiego końca naczynia aż cały pasek z
Zakład Biologii Molekularnej UMCS. luty 2015 4.    Uzyskane sferoplasty osadzić przez
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 ELEKTROFORETYCZNY ROZDZIAŁ DNA W ŻELU AGAROZOWYM Agaroz
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 Stosowane napięcie prądu podczas elektroforezy: Przy ni
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015 5.    Bromek etydyny 10 mg/ml 6.
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, wniesień 2014 Materiały i odczynniki 1.    Roztwór
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015Badanie wpływu antybiotyków na wzrost komórek bakterii E
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 201S i cykloheksimidu (CH), chloramfenikolu (C), streptomycy
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015Elektroforeza 2D jako narzędzie w diagnostyce chorób
Zakład Biologii Molekularnej UMCS, luty 2015Spis treści: 1.    Izolacja genomowego DN

więcej podobnych podstron