7808335475

sandwich) lub odwrotnie proporcjonalna (kompetycyjna ELISA) do ilości alergenu w próbce żywności. Stężenie kompleksu przeciwciało-antygen jest wyznaczone w oparciu o krzywą wzorcową wyznaczoną przy użyciu właściwych standardów. W tym ćwiczeniu zastosowano pośredni test ELISA. Ten schemat reakcji ELISA jest najczęściej stosowany i służy do wykrywania ilości badanego białka w próbie (homogenaty tkankowe) oraz w badaniach diagnostycznych np. do ustalenia miana przeciwciał we krwi.

III. Wykonanie Oznaczenie białka

1.    Przygotowanie 10-krotnych rozcieńczeń próbki badanej w H2O destylowanej.

2.    Naniesienie 25 pl przygotowanych rozcieńczeń próbki w 3 powtórzeniach na płytkę (próba kontrolna-25 pl H2O).

3.    Przygotowanie odczynnika WR przez zmieszanie odczynnika A i B w stosunku 1:50.

4.    Dodanie do wszystkich studzienek 200 pl odczynnika WR.

5.    Inkubacja płytki w temp 37 °C przez 0,5 h w inkubatorze.

6.    Pomiar absorbancji przy długości fali X= 540 nm.

7.    Obliczenie zawartości białka na podstawie krzywej wzorcowej dla albuminy (BSA).

Test ELISA

1. Przygotowanie x-krotnych rozcieńczeń próbek w buforze węglanowym tak, aby uzyskać 1-5 pg białka na studzienkę

2.0płaszczenie płytki poprzez naniesienie do studzienek 100 pl roztworu próbki badanej w 6 powtórzeniach (3 próbki badane i 3 próbki kontrolne), inkubacja przez noc w 4°C.

3.    Usunięcie roztworów ze studzienek i przepłukanie studzienek buforem PBS przy użyciu

płuczki automatycznej (4 razy).

4.    Blokowanie miejsc niezajętych przez antygen za pomocą żelatyny, inkubacja 1 h. Etap ten

zapobiega nieselektywnemu przyłączaniu się badanych białek do fazy stałej podczas następnych etapów testu.

5.    Usunięcie roztworów ze studzienek i przepłukanie płytki buforem PBS (4 razy).

6.    Dodanie do wszystkich studzienek (poza kontrolnymi) 100 pl rozcieńczonego roztworu

surowicy ludzkiej zawierającej IgE specyficzne dla P - laktoglobuliny, inkubacja 1 h. Próbki kontrolne nie zawierają surowicy ludzkiej!!!

7. Usunięcie roztworów ze studzienek i przepłukanie płytki buforem PBS (4 razy).

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
0*0. Zastosowanie enzymów do ilościowej analizy metabolitów-oznaczanie stężenia glukozy w materiale
0*0. Zastosowanie enzymów do ilościowej analizy metabolitów-oznaczanie stężenia glukozy w materiale
0*0. Zastosowanie enzymów do ilościowej analizy metabolitów-oznaczanie stężenia glukozy w materiale
Kszta?towanie ?rodowiska Przeciwerozyjna skuteczność płodozmianu jest odwrotnie 1*3 ha1) proporcjo
Magazyn6
3801 134 KLASYCZNA SZKOŁA EKONOMIKI wartości pieniądza są odwrotnie proporcjonalne do je
Komponenty mechatroniczne - Podręcznik Minos lub go nie ma; rzadziej analogowy - odwrotnie proporcjo
grupa b (2) I Wzrost w otoczu po posiłku proporcjonalny do ilości spożytej dotyczymstęp^Cych iminokw
img039 (6) 129 - Ze wzoru (11) wynika, że straty mocy czynnej są odwrotnie proporcjonalne do kwadrat
img039 (6) 129 - Ze wzoru (11) wynika, że straty mocy czynnej są odwrotnie proporcjonalne do kwadrat
skanuj0032 ładunku Q jest odwrotnie proporcjonalny do kwadratu odległości miedzy tymi ładunkami. Pra
page0210 206 konali się oni, że ciepło właściwe pierwiastków stałych jest niemal odwrotnie proporcyo
Keynesowska koncepcja cyklu W keynesowskiej koncepcji cyklu (przejścia od fazy wzrostu do fazy spadk
egzamin (9) Ł bardocj wncsła w kawałku o mttłq)u»J masie, E. imnśejszyła się odwrotnie proporcjonaln
fia9 przekaz następuje, a odwrotnie proporcjonalna do grubości Al przewodzący warstwy At Al Współcz
WP 1601070 MIARY ZUŻYCIA ELEMENTÓW MASZYN służą do ilościowej oceny procesu zużywania, lub, będąceg
wzoru (16); wagi sn odwrotnie proporcjonalno do długości ciągów p = •    t 5000 a)

więcej podobnych podstron