9515745537

Uniwersytet Warmińsko-Mazurski w Olsztynie; Katedra Mikrobiologii Przemysłowej i Żywności

Przedmiot: Mikrobiologia, Ćwiczenie 9,10

ANALIZY MIKROBIOLOGICZNE

Pobieranie prób do badań

Próbka pobrana do badań mikrobiologicznych powinna być „reprezentatywna” tzn. powinna odzwierciedlać stan całego badanego produktu. Najczęściej do badań ilościowych pobiera się lOg lub lOcm³ produktu. Produkty płynne należy przed pobraniem próbki dokładnie wymieszać. Z produktów stałych i sypkich jałowym skalpelem, łyżeczką lub świdrem pobiera się lOg produktu, przenosi do jałowego woreczka, dodaje się do 90cm³płynu do rozcieńczeń i homogenizuje (np. w stomacherze) w celu ujednolicenia próby.

Żywność o spodziewanej dużej liczbie drobnoustrojów (w jednym mililitrze/gramie mogą się znajdować miliony (10⁶) lub nawet miliardy (10⁹) komórek) należy przed posiewem rozcieńczyć - zwykle stosuje się szeregi 10-krotnych rozcieńczeń w postępie geometrycznym.

Przygotowanie 10-krotnych rozcieńczeń badanego materiału

Po wymieszaniu próbki badanego materiału płynnego pobiera się jałową pipetą 10 cm³, przenosi do kolby zawierającej 90 cm³ płynu rozcieńczającego (nie zanurzając pipety w płynie), dokładnie miesza. W ten sposób otrzymuje się rozcieńczenie 1:10, oznaczane jako 1. Z produktów stałych i sypkich rozcieńczenie 1:10 otrzymuje się na etapie ujednolicania próby, (patrz pobieranie prób do badań)

Następnie z pierwszego (1:10) rozcieńczenia (dokładnie wymieszanego) przenosi się 1 cm³ do probówki zawierającej 9 cm³ płynu rozcieńczającego (nie zanurzając pipety w płynie). W ten sposób otrzymuje się rozcieńczenie 1:100, czyli 2.

Po dokładnym wymieszaniu i przeniesieniu nową pipetą szklaną (lub końcówką pipety automatycznej) 1 cm³ rozcieńczenia 2 do 9 cm³ płynu rozcieńczającego otrzymuje się rozcieńczenie 1:1000, czyli 3.

W analogiczny sposób wykonuje się kolejne rozcieńczenia w zależności od spodziewanego zanieczyszczenia mikrobiologicznego badanej próby. Najczęściej stosowane w analizie mikrobiologicznej rozcieńczalniki to :

> płyn fizjologiczny - (0,85% roztwór wodny NaCl)

> płyn Ringera - (mieszanina: wody, chlorków: sodu, potasu, wapnia i dwuwęglanu sodu)

> płyn fizjologiczny z peptonem - ( płyn fizjologiczny z dodatkiem 0,1% peptonu kazeinowego)

> płyn fizjologiczny z cytrynianem

> płyn fizjologiczny z buforem fosforanowym

Metody oznaczeń ilościowych

W badaniach mikrobiologicznych żywności przeprowadza się oznaczenie liczby m. in.

S ogólnej liczby drobnoustrojów •S grzybów

S mikroorganizmów psychrotrofowych S bakterii kwaszących S bakterii proteolitycznych

S pałeczek z grupy coli lub całej rodziny Enterobacteriaceae