9524124393

Autoreferat dr Tomasz Gosiewski

i wydajność reakcji amplifikacji DNA E. coli: albumina wdowa (BSA) (Sigma); albumina owcza (SSA) (Sigma); betaina (Sigma); DMSO (Sigma); glikogen (Sigma); dextran (Sigma); Triton-X100 (Sigma). Amplifikację prowadzono przy użyciu polimerazy która okazała się najbardziej odporna na inhibicję hemem oraz z dodatkiem badanej substancji ochronnej.

Najwyższą aktywność w obecności hemu zachowała polimeraza Perpetual Taq (EURx), której aktywność nie spadła poniżej poziomu 0,65, a wynik ten był istotnie różny (p < 0,001) od pozostałych badanych polimeraz (ryc. 1). Z kolei wyniki wpływu substancji ochronnych na tę polimerazę wskazywały, że zarówno czułość jak i wydajność reakcji amplifikacji były niższe niż w próbce kontrolnej (bez dodatku substancji ochronnej) w przypadku każdej z badanych substancji.

Wpływ hemu na wydajność amplifikacji DNA przez badane polimerazy

Ryc. 1 Porównanie wpływu hemu na aktywność enzymów polimeraz; * - aktywność enzymu istotnie różna (p < 0.001) od pozostałych badanych w każdym punkcie pomiarowym.

Do dalszych badań wybrano polimerazę Perpetual Taq (EURx) oraz wykazano, że stosowanie protektorów polimeraz wpływa negatywnie na proces amplifikacji DNA.

Publikacja nr 3 i patent

(opracowanie skutecznej metody izolacji DNA wszystkich drobnoustrojów z krwi) Bardzo ważnym etapem diagnostyki przy wykorzystaniu techniki PCR jest jakość DNA. W przypadku izolowania DNA drobnoustrojów z krwi, konieczne jest uzyskanie wysoko oczyszczonego z hemu preparatu oraz odzyskanie możliwie jak najwięcej kwasów

Kraków, 2015