Krew
" Krew stanowi około 7% masy ciała. Większość (55% objętości)
to osocze, czyli płynne środowisko dla zawieszonych
elementów morfotycznych (upostaciowanych), którymi są
krwinki czerwone (erytrocyty i retikulocyty), krwinki białe
(leukocyty) oraz płytki krwi.
Funkcje krwi
" transportowa,
" obronną
" homeostatyczną (czyli utrzymującą stałość
parametrów biochemicznych i biofizycznych
organizmu).
Funkcja transportowa
" Krew dostarcza do komórek tlen (pobrany wcześniej z płuc)
oraz składniki energetyczne, sole mineralne i witaminy
(pobrane z przewodu pokarmowego). Zbędne produkty
przemiany materii (dwutlenek węgla, mocznik, kwas moczowy)
również są transportowane przez krew, która zabiera je z
tkanek i przenosi do narządów wydalniczych (nerek, skóry) i do
płuc (usuwają dwutlenek węgla).
" Krew odbiera ciepło z okolic, w których produkowane jest ono
w nadmiarze (np. z wątroby i z mięśni), i przenosi je do nieco
chłodniejszych regionów. Dzięki temu nasz organizm utrzymuje
w miarę stałą temperaturę w całym ciele, jedynie z niewielkimi
różnicami pomiędzy różnymi rejonami.
" transportuje również hormony, biorąc udział w regulacji przez te
aktywne biologicznie substancje wielu reakcji biochemicznych
w ustroju.
Funkcja obronna i udział w homeostazie
" Krew bierze udział w reakcjach obronnych
organizmu; przenoszone przez nią przeciwciała i
komórki odpornościowe zwalczają wszelkie
zagrożenia z zewnątrz i z wewnątrz.
Krew bierze udział w tworzeniu stałego środowiska
wewnętrznego, czyli w homeostazie.
Osocze
" Osocze jest zasadniczym składnikiem krwi, stanowi
medium, w którym zawieszone są elementy
morfotyczne. Zawiera składniki organiczne i
nieorganiczne (głównie jony sodowe, potasowe,
chlorkowe i węglanowe). Składniki organiczne to:
białka, składniki pozabiałkowe oraz lipidy osocza.
FUNKCJE OSOCZA:
- dzięki zawartości albumin i elektrolitów utrzymuje stałe
ciśnienie osmotyczne płynów ciała, stałą moc jonową
oraz pH
- transportuje substancje odżywcze, tlen, dwutlenek
węgla, szkodliwe produkty przemian związków
azotowych, hormony
Osmolalność
" Miarą aktywności osmotycznej roztworu jest osmolalność,
która jest równa iloczynowi liczby moli substancji
rozpuszczonej i liczby cząstek powstałych w wyniku dysocjacji
w 1 kg rozpuszczalnika (wody).
" Jednostką jest 1 osmol, czyli aktywność osmotyczna
roztworu, który zawiera 1 mol substancji nie dysocjującej
" lub jonów w 1 kg wody. Częściej używane są jednostki 1000-
krotnie mniejsze, czyli miliosmole (mosmol/kg),
odpowiadające stężeniu wyrażonemu w milimolach/kg wody.
Składniki nieorganiczne
" Stałość elementów osocza (szczególnie
nieorganicznych) jest kluczowa w prawidłowym
funkcjonowaniu komórek, szczególnie nerwowych i
mięśniowych. Wahania stężeń potasu i sodu odbijają
się na pracy tych układów i mogą np. doprowadzić (w
przypadku zwiększenia stężenia potasu) do
zatrzymania akcji serca. Składniki nieorganiczne
wraz z białkami osocza pełnią też zasadniczą rolę w
utrzymaniu odpowiedniego odczynu (pH) osocza, co
nazywamy równowagą kwasowo-zasadową
Białka osocza
" Zawartość białka w osoczu 6-8%
" Albuminy 60%
" Globuliny 40%
" Zmniejszenie zawartości białka po jego utracie
zachodzi rzadko (np. nerczyca)
" Często zmienia się stosunek np. frakcji albuminowej
do frakcji globulinowej (normalnie wynosi 1,5
" Zmniejszenie ilości albumin występuje z powodu ich
utraty (białkomocz, krwotoki) lub zahamowanie ich
syntezy (choroby wątroby)
" Zwiększenie zawartości globulin obserwuje się w
stanach zapalnych w przewlekłych chorobach
zakaznych lub schorzeniach wątroby
" Albuminy
" Niskocząsteczkowe białka Mcz do 60 kD wiążące wode i
utrzymujące ciśnienie osmotyczne krwi
" Spadek zawartości albumin może wywoływać obrzęki tkanek
"
" Globuliny (wysalają się przy 50% wysoleniu siarczanem amonu)
" masa cząsteczkowa ok. 100 kD białka biorące udział w procesie
krzepnięcia krwi, enzymy, fosfataz , proteazy, lipazy, białka o
właściwościach immunologicznych, białka wiążące metale np.:
transferyna (żelazo)
" Kinazy enzymy katalizujące fosforylacje białek.
" Fosfatazy. enzymy należące do grupy katalizują rozkład estrów
kwasu fosforowego
" Lipazy, enzymy z katalizujące rozkład lub syntezę estrów kwasów
tłuszczowych i gliceryny (tłuszczów)
" Proteazy to enzymy które dokonują hydrolizy wiązań
peptydowych
Otrzymywanie osocza
" W celu otrzymania osocza należy krew pobierać do
naczyń zawierających czynniki zapobiegające
krzepnięciu takich jak : heparyna, cytrynian sodu,
szczawian amonu (Ck=0,2 %). Substancje te wiążą
jony wapnia (oprócz heparyny) które są niezbędne do
krzepnięcia krwi. Krew należy możliwie szybko
odwirować przy 3000 obrotach/ minutę przez 15
minut. Roztwór po wirowaniu to osocze.
Surowica, serum, osocze krwi pozbawione białka
fibrynogenu (włóknika) oraz innych składników
biorących udział w krzepnięciu krwi (układ
krzepnięcia). Otrzymuje się przez pozostawienie krwi
na kilkadziesiąt minut w 37 stopniach (skrzep krwi
kurczy się) i wydziela się surowica którą ostrożnie
zbieramy i następnie wirujemy
Oznaczanie całkowitego białka osocza krwi metodą
biuretową
" Odczynniki
" 0,9 % roztwór NaCl
" 23 % roztwór Na2SO4 pH 6,3
" Odczynnik biuretowy: W 200 ml H2O rozpuścić 1,5 g
CuSO4*5H2O. W 300 ml H2O rozpuścić 6 g winianu
sodowo-potasowego. Po zmieszaniu tych roztworów
dodać 300 ml 10 % NaOH i uzupełnić wodą do 1 l.
Przechowywać w ciemnej butelce zamkniętej korkiem
gumowym.
" 1% wzorcowy roztwór albuminy surowicy bydlęcej
(BSA) w 0,9 % NaCl.
Procedura
" " Pobrać do probówki 0,5 ml osocza i 9,5 ml roztworu
Na2SO4. Po wymieszaniu inkubować w cieplarce w 37oC przez
30 minut
" Wymieszać i pobrać 2 ml zawiesiny (na oznaczenie białka
całkowitego)
" Resztę przesączyć przez twardy sączek(???) w cieplarce.
" 2 ml klarownego przesączu dodać do probówki A (albuminy).
" Trzecia próba kontrolna (K) dodać 2 ml roztworu Na2SO4.
"
" Do wszystkich probówek dodać po 3 ml odczynnika
biuretowego i wymieszać.
" Po 15 minutach określić wartość absorbancji wobec próby
kontrolnej (długość fali 530 nm)
Krzywa kalibracyjna
" Do probówek odmierzyć kolejno następujące ilości roztworu 1%
albuminy:
" 0,2; 0,4;0,6; 0,8 i 1,0 ml. Uzupełnić do 2ml 0,9% roztworem
NaCl.
" Do wszystkich probówek dodać po 3 ml odczynnika
biuretowego i po 15 min oznaczyć absorbancje wobec próby K.
" Odczynnik biuretowy dodawać co 0,5 min do wszystkich prób.
Badanych i krzywej wzorcowej.
" Oznaczać po 15 min co 0,5 minuty by zachować ten sam czas
reakcji barwnej.
" Metoda jest liniowa do stężenia 10 % białka a wiec można
kreślić linię prostą
" Tangens nachylenia da nam wartość współczynnika
absorbancji.
Przykład
" Ap=0,334
" Krzywa A= 0,108; 0,216; 0,324; 0,432; 0,540
" Do oznaczenia brano 0,1 ml osocza (0,5 ml osocza znajdowało
się w 10 ml roztworu)
" Należy obliczyć mnożniki wzorca dla każdej próby
" Mnożnik wzorca [%]M =Vwzorca/ V badanej próby
" M1=2; M2=4; M3=6; M4=8; M5 =10
" Współczynnik kalibracji F=(M/Abs) * Cwz
" Współczynniki kalibracji wynoszą
" F=18,5 ; 18,5; 18,5; 18,5; 18,5
" Stężenie białka wynosi
" C [%]=F*Abad
" C [%]=18,5*0,334
" C=6,179%
Ap=0,385
Krzywa A= 0,138; 0,210; 0,364; 0,462; 0,590
V = 0,2: 0,4: 0,6; 0,8
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
Serie1
0,3
0,2
0,1
0
0 2 4 6 8 10 12
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
bch09nc1bch09nc5bch09nc7bch09nc4bch09nc6bch09nw2bch09nc3bch09nw7bch09nw1bch09nw6więcej podobnych podstron