Ćwiczenie 8

Oznaczenie aktywności arylosuufatazv

Oznaczenia aktywności arylosulfatazy (EC 3.1.6.1) studenci w materiale glebowym z doświadczenia dwuczynnikowcgo. które na ćwiczeniu nr 2.

Arylosulfata/a katalizuje hydrolizę fenolosiarczanów wg wzoni:

R OSO, + HiO-► R-OH + H* + (SO«)¹

próbka kontrolna

l tWwaty{

2.    Dodać 4

3.    Wymieś

4.    Zinduią (temp.!

5 Po 60 n 6. Bctpoj

•    25

•    \i

Jest ona wytwarzana w organizmach drobnoustrojów, roślin i nna^ Podstawą oznaczenia jest określenie ilości wytworzonego ś-ntirafem,, z 4-nitrofenylosinrczanu potasu. Im więcej powstanie 4-nilrolcnohi tym jest aktywność arylosulfatzay.

Procedura wykonania oznaczeń

7.    Wymi kolbk

8.    Pobn

9.    Dodi U). Wyr U.Mie 12.Wy

Próbka badana

Umieścić 1 g gleby w kolbie stożkowej o pojemności 100 cm i. Kolejno dodać:

•    4 cm’0,5 M buforu octanowego o pH 5,8,

•    I cm⁵ 0,02 M roztworu PNS.

). Wymieszać zawartość kolbki przez kilka sekund.

1 Zamknąć kolbkę korkiem i wstawić do termostatu na 60 min. (temp. 37°C).

5.    Po 60 min. wyjąć kolbkę z termostatu.

6.    Przygotować zestaw do sączenia (kolbka stożkowa o pojemności 100 cm*, lejek, twardy sączek).

7.    Bezpośrednio przed sączeniem do gleby dodać 25 era⁵ wody destylowanej.

8.    Wymieszać zawartość kolbki przez kilka sekund.

9.    Przenieść zawartość inkubowanej kolbki na sączek (zestaw do sączenia)

10.    Pobrać 6 cm’ przesączu do probówki o pojemności 25 cm^J.

11.    Dodać 4 cm' 0,5 M NaOH.

12.    Wymieszać zawartość probówki przez kilka sekund.

13.    Mierzyć ekstynkcję wytworzonego 4-nitrofenolu (PNP) t» spektrofotometrze (420 nm) wobec próbki ślepej.

14.    Wyniki pomiaru podstawić do wzoni nr 1.

Próbka ślep

1.    Uf

2.    Di

3.    Zi

Obliczeni

Aryl-1 Es -i Et -■ B, -2,4 -30 -6 _ 100-