94

Fosfatazy wykazują niską specyficzność substratową i w związku z tym zależnie od optimum pH dla ich działania klasyfikowane są na: fosfatazy kwaśne o optimum pH ok. 5 i

fosfatazy alkaliczne o optimum pH ok. 9.

Fosfataza kwaśna występuje w dużych stężeniach w nasionach roślin i gruczole krokowym człowieka. Aktywność jej bardzo silnie wzrasta w chorobie nowotworowej tego gruczołu, co wykorzystuje się w diagnostyce do wczesnego rozpoznawania tej postaci raka. W nasionach roślin aktywność fosfatazy kwaśnej silnie wzrasta podczas kiełkowania, a następnie maleje w miarę wzrostu siewek. Prawdopodobnie wzrost jej aktywności związany jest z uwalnianiem fosforanu nieorganicznego z organicznych form zapasowych fosforanu, np. z mezoinozytoloheksafosforanu (kwasu fitynowego).

lość fosfataz oznacza się zazwy czaj używając sztucznych substratów, takich jak:

2-giicerotostoran, fenylofosforan, fosforan fenoloftaleiny, 4-nitrofenylofosforan. Aktywność enzymu mierzy się ilością uwolnionego fosforanu lub części organicznej estru po inkubacji enzymu z substratem w ściśle określonych warunkach. Szczególnie dogodny jako substrat jest 4-nitrofenvlofosforan, gdyż jeden z produktów reakcji przechodzi w formę barwną już po zalkalizowaniu środowiska.

W ćwiczeniu będzie wykorzystany wodny wyciąg enzymu z kiełków pszenicy. Jako substrat będzie użyty 4-nitrofenylofosforan. Reakcję hydrolizy tego związku z udziałem fosfatazy i tworzenie barwnego produktu pokazano na rysunku 22. Powstający produkt reakq'i — 4-nitrofenol — przyjmuje w środowisku zasadowym barwę żółtozieloną i jest miarą aktywności fosfatazy.

RYS. 22. Mechanizm reakcji hydrolizy 4-nitrofenylofosforanu z udziałem fosfatazy kwaśnej i powstawanie produktu barwnego

Przyjęta w wykonaniu temperatura inkubacji 38°C wprawdzie odbiega od temperatury standardowej, lecz nie powoduje jeszcze denaturacji enzymu, a przyspiesza szybkość reakcji i jest często stosowana w badaniach klinicznych.

Część a ćwiczenia może być wykonana w trzech układach:

1. Dwie osoby wyznaczają stałą K_m (3 godz.).

83

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
DSC00151 (22) przewodnictwo jest najmniejsze, ponadto białka wykazują również najmniejszą ruchliwość
• W celu rozróżnienia związków allelopatycznych, w zależności od organizmu wydzielającego (donora) l
W związku z tym, zaopatrzenie ma podstawowe znaczenie dla kształtowania powiązań wewnątrz
• W celu rozróżnienia związków allełopatycznych, w zależności od organizmu wydzielającego (donora) l
Związki zawodowe w zależności od różnic ideologicznych można podzielić na związane z komunizmem
Działania faktyczne Działania te tym różniąsię od działań prawnych, że ich celem nie jest wywołanie
ś-ym -HAŁAS TURBIN -ZALEŻNOŚĆ OD WIATRU -ZAGROŻENIE DLA PTACTWA -ZAJMUJĄ ONE DUŻE
wystepowanie?cji metamorficznych w zależności od temp i pH Temperatura [°C] Ryc. 24. Schemat występ
ZAWIESZENIE POSTĘPOWANIA O WYDANIE DECYZJI O WARUNKACH ZABUDOWY W ZALEŻNOŚCI OD TEGO CZY DLA DANEGO
76724 Slajd8 (53) Zależnie od kształtu ziarn i sposobu ich rozmieszczenia w przestrzeni dzieli się j
Obraz
9 zależnej od temperatury i pH. Przykładem może być enolowa postać acetonu CH3-C(OH)=CH2 pozos
DSC09268 uskiyj Wykres 5 Charakterystyka napięcia wyjściowego w zależności od napięcia wejściowego d
Badania rzeczywistych konstrukcji 69 ki - współczynnik zależny od rozkładu odkształceń, dla zginania
-HAŁAS TURBIN -ZALEŻNOŚĆ OD WIATRU -ZAGROŻENIE DLA PTACTWA -ZAJMUJĄ ONE DUŻE

więcej podobnych podstron